组香菇多糖对荷瘤小鼠胸腺树突状细胞表达的影响说课.pptVIP

香菇多糖 对荷瘤小鼠胸腺树突状细胞表达的影响 杨丽萍3110103718 临床1103 丁莉娟3110103805 临床1103 何璐璐3110103604 临床1103 童逸瑶3110103701 临床1108 背景 肿瘤已成为人类健康的头号杀手，肿瘤的治疗研究也是生物医学领域一个炙手可热的方向。 *由于肿瘤抗原的存在，势必被机体免疫系统所识别，并由此激发特异性免疫反应，包括细胞免疫和体液免疫。 *在细胞免疫方面，T淋巴细胞、K细胞（抗体依赖性细胞毒细胞）、NK细胞（自然杀伤细胞）和巨噬细胞对肿瘤细胞均具杀伤作用。 *肿瘤的体液免疫主要是抗肿瘤抗体对肿瘤细胞的破坏效应。 研究现状 从香菇的子实体提取物中获取的主要有效分——香菇多糖，作为一种天然的免疫调节剂，对各种恶性肿瘤有较好的防治作用[1]。 香菇多糖在实验动物中有促进B淋巴细胞的分化、增殖，增强免疫功能的作用[2,3]。 Mushiake等[4]的研究结果还表明：香菇多糖能通过改善树突状细胞的功能，调节DCs介导的特异性免疫，增强抗瘤活性，最终提高荷瘤鼠的存活率。 树突状细胞与抗癌——树突状细胞 树突状细胞来源 人树突状细胞起源于造血干细胞。 DC的来源有两条途径。 树突状细胞与抗癌——树突状细胞 树突状细胞主要功能 机体功能最强的专职抗原递呈细胞(APC) 树突状细胞与抗癌——树突状细胞抗肿瘤 外周DCs可迁入胸腺，以便更高效率地诱导T细胞分化增殖，由它激活的细胞免疫应答在机体抗肿瘤中起主导作用[6,7]。 1、 MHC-Ⅰ类和MHC-Ⅱ类分子—抗原呈递分子 共刺激分子→第二信号 2、DC与T细胞结合 IL-12、IL-18→T细胞增殖，诱导CTL生成，主导Th1型免疫应答，利于肿瘤清除； 激活穿孔素P颗粒酶B和FasL/Fas介导的途径增强NK细胞毒作用； 3、 趋化因子(CCK)：CD4+T趋化、长期存在；正反馈旁分泌方式活化DC； 某些抗血管生成物质(如IL-12、IFN-γ)及前血管生成因子而影响肿瘤血管的形成。 CD8+ T 香菇多糖与DC—香菇多糖 香菇多糖活性成分：β—(1—3)—D— 葡聚糖 香菇多糖与DC—香菇多糖抗肿瘤 本实验将通过观察胸腺结构，S100和CD1a免疫组化标记（S100标记成熟的TDCs，用CD1a标记未成熟TDCs。），计算S100+细胞在参照物(胸腺)中所占面积百分比，计算TDCs密度，测算胸腺指数、肿瘤指数、抑瘤率等指标，探讨香菇多糖对荷瘤小鼠S100+ 胸腺树突状细胞(TDCs)和CD1a+ TDCs表达的影响。 原创点： 阐明香菇多糖能增加TDCs数量及促进其分化成熟。 实验设计 实验室要求 实验步骤 观察指标 统计分析 预期实验结果 实验室要求 实验仪器 实验对象 药品试剂 实验室要求——实验仪器 SABC试剂盒 精密天平 组织匀浆机 泡沫盒 放液氮的小型保温杯或者液氮罐 血球计数板 进口样本冻存管50个 小鼠取组织学标本用手术器械2套 1ml注射器 30支 DT2000图像分析软件V2.0 统计分析软件SPSS19.0 实验室要求——实验对象 清洁级ICR小鼠，雌雄各半，20-25g，60只 （由浙江大学实验中心提供） 实验室要求——药品试剂 小鼠S180细胞株 兔抗小鼠S100 兔抗小鼠CD1a 注射用香菇多糖 环磷酰胺 4%甲醛固定液 1500ml 组织固定用250ml 4%甲醛2瓶（敞口瓶+瓶盖） 生理盐水1000ml 液氮 5 L 实验方法 荷瘤S180鼠模型的建立 动物分组 普通光镜检查 免疫组织化学标记和观察分析 胸腺指数，肿瘤指数，抑瘤率的计算 实验方法——荷瘤S180鼠模型的建立 取已接种7 d肿瘤生长良好的S180腹水型小鼠，抽吸乳白色的浓稠腹水以无菌生理盐水稀释后，用血球计数板进行活细胞计数，调整细胞数为1×107，制成肿瘤细胞悬液(活细胞率﹥95%)。 在小鼠右前腋皮下注射0.2 ml S180细胞悬液，制成实体瘤模型。 实验方法——动物分组 组号 (n=10) 组名 处理 第1天 第2~8天 第9天 Ⅰ 生理盐水对照组 静脉注射0.2 ml生理盐水 ?制片HE染色观察胸腺结构 ?S100和CD1a免疫组化标记 ?计算S100+细胞在参照物(胸腺)中所占面积百分比 ④计算TDCs密度 ⑤测算胸腺指数、肿瘤指数、抑瘤率等指标 Ⅱ 荷瘤模型组 接种肿瘤 每日静脉注射生理盐水0.2 ml Ⅲ 荷瘤环磷酰胺组 每日静脉注射环磷酰胺0.2 ml(每只每次1 mg) Ⅳ 荷瘤香菇多糖低浓度组 每日静脉注射香菇多糖0.1 ml(每只每次0.