3蛋白质与酶工程酶的提取、分离和纯化剖析.pptVIP

一、概述 二、酶的提取 三、酶的分离纯化 四、酶的结晶 五、浓缩与干燥 六、酶纯化步骤的设计及评价 一、概述 1-1 酶提取与分离纯化的定义 将酶从细胞或其它含酶原料中提取出来，再与其它物质分开，从而获得所需酶的技术过程 *酶的纯化程度根据需要而定 *纯化方法多种多样，为获得较好的效果往往是2种或2种以上联合应用 1-2 提取纯化之目的 1)酶催化功能的应用 2)酶学研究 酶的结构、功能、催化机制、催化动力学 酶的生物合成及其调控规律等 1-3 纯化的必要性 1)生物细胞中同时存在多种多样的酶 2)多酶可能作用于同一个底物 3)酶在生物细胞中的分布并不是均一的 二、酶的提取（extraction) 2-1 了解所分离酶在细胞中的分布 1、细胞外酶：由细胞内产生后分泌到胞外发挥作用的酶；大多属于水解酶，通常含量高，容易得到 2、细胞内酶：在细胞内合成后并不分泌到细胞外，而在细胞内起催化作用。该类酶在细胞内往往与细胞器结合，不仅有一定的区域性，而且催化的反应具有一定顺序性 真核细胞内酶的分布 ①细胞膜：ATP酶、腺苷酸环化酶等 ②细胞核：DNA聚合酶、连接酶和RNA聚合酶等 ③线粒体：三羧酸循环、电子传递、氧化磷酸化、尿素循环、脂肪酸氧化、脂肪酸合成酶以及蛋白质合成、DNA聚合酶、RNA聚合酶等 ④高尔