DNA的电泳检测剖析.pptVIP

DNA的琼脂糖凝胶检测 在分光光度计检测的基础上，进一步用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA的纯度与浓度，重点检测DNA是否降解，是否含RNA与蛋白质。 实验目的 了解琼脂糖电泳法检测DNA质量与浓度的原理 掌握琼脂糖电泳法检测DNA质量与浓度的方法 学会分辨不同质量DNA的电泳带型 实验原理 电泳是现在用于分离和纯化DNA片段的最常用技术。制备好一块“胶”即一块包含电解质的多孔支持介质，并把它置于静电场中，DNA分子将向阳极移动，这是因为DNA分子沿其双螺旋骨架两侧带有富含负电荷的磷酸根残基。当DNA长度增加时，来自电场的驱动力和来自凝胶的阻力之间的比率就会降低，不同长度的DNA片段就会出现不同的迁移率。因而就可依据DNA分子的大小使其分离。 琼脂糖浓度 溴化乙锭（EB）是一种吖啶类染料，它在紫外灯照射下能发射荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中电泳时，琼脂糖凝胶中的EB就插入DNA分子中形成荧光络合物，使DNA发射的荧光增强几十倍，电泳后就可直接紫外灯照射下检测琼脂糖中的DNA。 电泳缓冲液的组成  常用的电泳缓冲液的配制 加样缓冲液 DNA片段长度标记 DNA片段长度标记通常叫作 DNA Marker,本实验使用Bio DL2000 为DNA片段长度标记，