第34章DNA的复制和修复12详解.pptVIP

二 、DNA复制的起点和方式 用遗传学和生物化学的方法可以确定大肠杆菌染色体DNA的复制起点在基因图谱上的位置。 DNA聚合酶催化的链延长反应 2.大肠杆菌DNA聚合酶 大肠杆菌三种DNA聚合酶比较 聚合酶IV 和V: 1999年发现,它们涉及DNA的错误倾向修复 (error prone repair） 连接酶连接切口 RNA引物的合成： 以DNA为模板，NTP为原料，在引物合成酶催化下，合成10-几十个核苷酸。 为什么？ 这是保证DNA聚合过程高度精确的又一措施。已知DNA 聚合酶具有3??5?外切酶功能校对复制过程中的核苷酸，也就是说聚合酶在开始形成一个新的磷酸二酯键前，总是检查前一个碱基是否正确，它不能从头开始合成。因此先合成一条低忠实性的多核苷酸来开始DNA的合成，并以核糖核苷酸来表示是“暂时”的，当DNA聚合以后再将其切除，以高忠实性的脱氧核苷酸取而代之，确保复制的忠实性。 DNA复制的调节 DNA复制的调节在起始阶段，一旦开始就一直到完 DNA复制的起始与DNA的甲基化和细菌质膜的相互作用有关 oriC 位点的回文序列GATC（11个）的甲基化 新合成链的甲基化滞后13 min→半甲基化DNA 半甲基化DNA与质膜结合→阻止Dam甲基化酶的作用、抑制Dna蛋白与起点的结合 随质膜生长，DNA移向细胞两半部分→DNA脱落→甲基化→新一轮复制。 3.复制的终止 七、真核生物DNA的复制 哺乳动物的DNA聚合酶 端粒合成的一种模型 第二节 DNA的损伤与修复 三、切除修复 四、重组修复 五、应急反应（SOS）和易错修复 六、与DNA修复有关的人类遗传疾病 2. 遗传性大肠癌、结肠癌的临床特征 3. 与重组修复相关基因的改变 Brca 1、 Brca 2基因变异 80%几率患乳腺癌 第三节 DNA的突变 DNA突变的类型 1、形成嘧啶二聚体 2、光复活酶结合于 损伤部位 3、酶被可见光激活 4、修复后酶被释放 二、直接修复 UV 高等哺乳动物 无此修复机制 碱基缺陷或错配 结构缺陷 切开 核酸内切酶 核酸外切酶 切除 DNA聚合酶I DNA连接酶 AP核酸内切酶 切开 切除 修复 连接 N-糖苷酶 (UvrABCD) 核酸外切酶 碱基切除修复（单个碱基缺陷时） 核苷酸切除修复（片段缺陷时） A2B BC B C D U C→ → → U A → → → I 脱氨基 脱氨基 原核细胞核苷酸切除修复酶的功能 连接切口 DNA连接酶 填补缺口 DNA polI/II 解链酶 UvrD 在损伤部位的5‘-端切开DNA链 （8个核苷酸） UvrC 识别损伤并在3‘-端切开DNA链 （5个核苷酸） UvrB 识别损伤并充当分子接头 UvrA 功能 蛋白质 重组 复制 修复 许多造成DNA损伤或抑制修复的处理均能引起一系列复杂的诱导反应，称为应急反应（SOS response)。 SOS反应包括： 诱导DNA损伤修复 诱变效用 细胞分裂抑制等 SOS诱导的修复反应包括： 避免错误的修复（error free repair) SOS系统诱导切除和重组修复的酶 易错修复 (error-prone repair) SOS系统还能诱导缺乏校正功能的DNA聚合酶 未诱导的细胞 靶基因 lexA基因被LexA 蛋白质部分阻遏 recA基因被LexA 蛋白质部分阻遏 （?40个不同的位点被阻遏） LexA(阻遏物) RecA(辅蛋白酶) 靶基因表达 uvrABC 等） lexA靶基因表达 但产物被分解 recA（辅蛋白酶） 大量表达 RecA促使分解LexA 诱导的细胞 单链DNA ATP SOS反应是由LexA阻遏物和RecA蛋白相互作用引起的 着色性干皮病 是一种隐性遗传性疾病，有些呈性联遗传。因核酸内切酶（与切除修复有关的酶）异常造成DNA修复障碍所致。临床以光暴露部位色素增加和角化及癌变为特征。 幼年发病，常有家族发病史。 多数患者于20岁前因恶性肿瘤而死亡。 错配修复相关基因的改变 : MSH2, MSH6, PMS1 ， MLH1, MSH3, PMS2. DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的。它是一种封闭DNA链上切口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的3- PO4与另一DNA链的3-OH生成磷酸二酯键。 这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外)，而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。 DNA连接酶的主要功能就是在DNA聚合酶Ⅰ催化聚合，填满双链DNA上的单链间隙后封