细胞生物学_翟中和第三章介绍.ppt

细胞生物学 七、PCR 技术 PCR即：polymerase chain reaction。 反应体系：①样品DNA；②引物（primer），约15-20个核苷酸；③4种dNTP；④Tag DNA聚合酶，来自于嗜热水生菌Thermus aquaticus，最适作用温度75~80℃，短时间在95℃下不失活。⑤缓冲体系和Mg2+。 反应过程：①变性：约90-95℃；②复性：约60℃左右；③延伸：70-75℃；④重复 “变性——复性——延伸” 过程20-30次循环。 细胞生物学 PCR原理 细胞生物学 第三节细胞培养、细胞工程与显微操作技术 一、细胞培养 （一）动物细胞培养 群体培养（mass culture）：将含有一定数量细胞的悬液置于培养瓶中，让细胞贴壁生长，汇合（confluence）后形成均匀的单细胞层； 克隆培养（clonal culture）：培养高度稀释的细胞悬液，细胞贴壁生长，每一个细胞形成一个细胞集落，称为克隆。 转鼓培养法：为制取细胞产品而设计，大容量旋转培养，使培养的细胞始终处于悬浮状态之中。 细胞生物学 原代培养 （primary culture）：即：培养直接来自动物机体的细胞群，将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶称为传代或传代培养（Passage）。 细胞株（cell strain）：从原代培养细胞群中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群。 细胞系（cell line）：从肿瘤组织培养建立的细胞群或培养过程中发生突变或转化的细胞，可无限繁殖。 克隆（clone）：亦称无性系。指由同一个祖先细胞通过有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群。 细胞生物学 细胞系名称 细胞类型 来源 3T3 成纤维细胞 小鼠 HeLa 宫颈癌上皮细胞 Henrietta Lacks BHK21 成纤维细胞 叙利亚仓鼠 PtKl 上皮细胞 袋鼠 L6 成肌细胞 大鼠 PCI2 嗜铬细胞 大鼠 SP2 浆细胞 小鼠 SP2／0 骨髓瘤浆细胞 小鼠 CHO 卵巢细胞 中国地鼠 实验室中常用的几种细胞系 细胞生物学 （二）植物细胞培养 外植体培养：诱发产生愈伤组织。用于研究植物的生长发育、分化和变异；进行无性繁殖；制取代谢产物。 悬浮细胞培养：适合于进行产业化大规模细胞培养，制取植物代谢产物。 原生质体培养：培养脱壁后的细胞，特点： ①比较容易摄取外来的遗传物质，如DNA； ②便于进行细胞融合，形成杂交细胞； ③适宜条件下可产生细胞壁，经诱导分化成完整植株。 单倍体培养：通过花药或花粉培养可获得单倍体植株。 细胞生物学 Animal Cell Culture 细胞生物学 二、细胞工程 （一）细胞融合 通过培养和介导，两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程称为细胞融合（cell fusion）或细胞杂交。 同核体：相同基因型的细胞融合而成。 异核体：不同基因型的细胞融合而成。 自发融合：同种细胞在培养过程中自发合并的现象。 诱发融合：异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合。 诱导细胞融合的方法：生物方法（仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒 ）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（电击和激光）。 细胞生物学 单克隆抗体技术 正常淋巴细胞（如小鼠脾细胞）具有分泌抗体的能力，但不能长期培养，瘤细胞（如骨髓瘤）可以在体外长期培养，但不分泌抗体。于是英国人Kohler和Milstein 1975将两种细胞杂交而创立了单克隆抗体技术，获1984年诺贝尔奖。 细胞生物学 （三）细胞拆合与显微操作技术 １、物理法：用机械方法或短光波把细胞核去掉或使之失活，然后用微吸管吸取其他细胞的核，注入去核的细胞质中，组成新的杂交细胞。 ２、化学法：用细胞松弛素B处理细胞，细胞出现排核现象，再结合离心技术，将细胞拆分为核体和胞质体两部分，由于核体外表包有一层细胞质膜和少量的胞浆，因而在PEG或仙台病毒的介导下，核体可与另一胞质体融合，形成重组细胞。 细胞生物学 第四节　用于细胞生物学研究的模式生物 　　　生物学家通过对选定的生物物种进行科学研究，用于揭示某种具有普遍规律的生命现象，此时，这种被选定的生物物种就是模式生物。比如，孟德尔在揭示生物界遗传规律时选用豌豆作为实验材料，而摩根选用果蝇作为实验材料，在他们的研究中，豌豆和果蝇就是研究生物体遗传规律的模式生物。 细胞生物学 模式生物的特点有: 1)生理特征能够代表生物界的某一大类群。 2)容易获得并易于在实验室内饲养繁殖。 3)容易进行实验操作,特别是遗传学分析。 4)个体较小,生长繁殖快。 生命科学研究中常用的模式生物有： 病毒，细菌，酵母，原生动物，黏菌，蛙，海胆， 线虫，果蝇，斑马鱼，小鼠 细胞生物学 １、病毒： １）特点： 结构简单（壳体和核酸） 进入细胞才能进行复制 ２）应用： 适合遗传操作，