qbx_酵母细胞的固定化摘要.pptVIP

* 专题4 课题3 酵母细胞的固定化 思考：通过课题背景分析，你有何体会？ 固定化酶： 固定化细胞： 设想：将酶固定在不溶于水的载体上 酶： 优点： 实际问题: 优点： 实际问题： 设想：酶是细胞合成的，能否将合成酶的细胞直接固定 优点： 反复利用，成本低，操作更容易 催化效率高，低耗能，低污染 对环境敏感，易失活；难收回，成本较高；反应后酶混在产物中影响产品的品质。 酶既能与反应物接触，又能与反应物分离，反复利用 一种酶只能催化一种化学反应，而在实践中，很多产物的形成都是通过一系列的酶促反应才能完成的。 阅读 基础知识——固定化酶的应用实例， 回答问题： 1.能将葡萄糖转化为果糖的酶是 ，该酶稳定性好。 2. 反应柱上的孔应满足 无法通过，反应溶液 通过。 葡萄糖异构酶 酶颗粒 可以自由 固定化酶的反应柱示意图 葡萄糖 反应柱 果糖 上端注入 下端流出 将酶（或细胞）包埋在细微网格里 将酶（或细胞）相互连接起来 将酶（或细胞）吸附在载体表面上 包埋法 化学结合法 吸附法 将酶或细胞固定化的方法 酶和细胞固定方法的选择原因 ①细胞个大，酶分子很小 ②个体大的细胞难以被吸附或 结合而个小的酶容易从包埋的 材料中漏出 2.固定化酶和固定化细胞的联系与区别 联系：应用相同，都能催化某些反应 区别： （1）固定化细胞技术操作容易，成本低，容易回收； （2）固定化细胞技术对酶活性影响更小； （3）固定化细胞固定的一系列酶； （4）由于大分子难以通过细胞膜，因此固定化细胞的应用有一定的限制； 思考：如果想将微生物的发酵过程变成连续的酶反应，选择固定化酶还是固定化细胞呢？如果反应物是大分子物质呢？ 3.固定化酶和固定化细胞常用的载体材料 明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等， 其共同的特点是不溶于水的多孔性载体 海藻酸钠 聚丙烯酰胺 明胶 三、实验操作 （一）制备固定化酵母细胞 阅读P50~51思考下列问题： （1）制备过程包括哪几个步骤？ （2）你认为哪个步骤的操作是最重要的一环？ （一）制备固定化酵母细胞 （二）用固定化酵母细胞发酵 　　活化是指让处于休眠状态的微生物重新恢复正常生活状态的过程。 〖思考1〗活化是指什么？ （1）酵母细胞的活化： 1g干酵母＋10mL蒸馏水→50mL烧杯→搅拌均匀→放置1h，使之活化。 （2）配制CaCl2溶液： 0.83gCaCl2＋150mL蒸馏水 →200mL烧杯→溶解备用。 防止海藻酸钠焦糊。 （3）配制海藻酸钠溶液： 0.7g海藻酸＋10mL水→50mL烧杯→酒精灯微火（或间断）加热，并不断搅拌，使之溶化→蒸馏水定容到10mL。 〖思考2〗微火加热并不断搅拌的目的是什么？ （关键步骤） (4)海藻酸钠溶液与酵母细胞的混合： 　　将溶化的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入活化酵母细胞液，搅拌后吸入到注射器中。 〖思考3〗为什么要海藻酸钠溶液冷却后才能加入酵母细胞？ 防止高温杀死酵母细胞。 （5）固定化酵母细胞： 　　以恒定速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到CaCl2溶液中，形成凝胶珠状颗粒。 （二）固定化酵母细胞的发酵 （6）冲洗：将固定的酵母细胞凝胶珠用蒸馏水冲洗2～3次。 （7）发酵：150mL10％葡萄糖＋固定化酵母细胞→200mL锥形瓶→密封→25℃发酵24h。 〖思考4〗在利用固定化酶或固定化细胞进行生产的过程中，需要无菌操作吗？ 需要。 练习： 1、下列说法不正确的是（ ） A、葡萄糖与固定化葡萄糖异构酶接触，转化成的是果糖 B、从固定化酶反应柱下端流出的是果糖 C、高果糖浆不会像蔗糖那样诱发肥胖、糖尿病、龋齿和心血管病 D、酶溶解于葡萄糖溶液，可以从糖浆中回收 D 2、研究认为，用固定化酶技术处理污染物是很有前途的。如将从大肠杆菌得到的磷酸三酯酶固定到尼龙膜上制成制剂，可以用来降解残留在土壤中的有机磷农药，与用微生物降解相比，其作用不需要适宜的（ ） A、温度 B、PH C、水分 D、营养 D 3.使用固定化细胞的优点是( ) A.能催化大分子物质的水解 　 B.可催化一系列化学反应 C.与反应物易接近 　 D.有利于酶在细胞外发挥作用 B *