钱迪-纳米二氧化钛对多重耐药质粒RP4接合转移的影响应用研究.doc

D201002043 密级： 纳米二氧化钛对多重耐药质粒RP4接合转移的影响研究 Effect of nano- TiO2 on the conjugative transfer of the RP4 plasmid 姓 名 钱迪 学科专业 生物化学与分子生物学 研究方向 基因工程与酶工程 指导教师 张部昌 教授 完成时间 2013年4月 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得　　　　　或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：　　　　　　　　　签字日期：　　　　年　　月　　日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解　　　　　　有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权　　　　可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 （保密的学位论文在解密后适用本授权书） 学位论文作者签名：　　　　　　　　　导师签名： 签字日期：　　　年　　月　　日　　　签字日期：　　　　　年　　月　　日 学位论文作者毕业去向： 工作单位：　　　　　　　　　　　　　　　　电话： 通讯地址：　　　　　　　　　　　　　　　　邮编：摘要。细菌抗生素抗性基因是由于过度使用和滥用抗生素细菌产生抗生素抗性突变另一是细菌通过水平转移的方式获得抗生素抗性基因。DNA的转移。细菌抗生素抗性基因往往编码在可移动质粒上通过质粒接合转移在细菌间进行传播。接合转移。TiO2具有比表面积大，光催化活性高，化学性质稳定等特点，因而成为优良的光催化材料，并被广泛用于空气净化、污水处理和消毒杀菌等方面。然而纳米TiO2在环境中的残留对环境、生物以及人体的负面影响正在引起人们重视。大量研究表明纳米TiO2可产生大量活性氧破坏细菌细胞膜影响蛋白基因载带DNA或RNA分子进入动物和植物细胞。现在水环境中存在着大量耐药菌和纳TiO2，纳米TiO2是否耐药基因细菌间传播还不清楚。本研究基于以上事实提出水中纳米TiO2可作用于细菌细胞膜和/或调控基因表达促进细菌耐药基因接合转移的假说并建立质粒介导的接合转移模型研究水中TiO2对细菌耐药基因接合转移影响及规律分析TiO2作用过程中各种因素的影响规律从细胞生物学分子生物学角度探讨了纳米TiO2促进细菌耐药接合转移机制。主要研究结果如下： 研究结果表明TiO2可以显著地促进RP4接合转移，而且随着纳米TiO2浓度的升高，这种促进作用先逐渐增强再减弱。0.5 mmol/L纳米TiO2干预下，接合4h后接合转移频率上升约100倍，1 mmol/L干预组产生的接合转移频率最高，是空白对照组的150倍左右，随后开始下降。TiO2的作用效果随浓度的变化有峰值出现，可能原因是纳米TiO2在对RP4接合转移有促进作用的同时，能够使细胞产生严重的氧化应激反应，对细菌细胞产生毒性，造成细菌死亡。TiO2促进 RP4接合转移的作用随着初始菌密度的升高而增强。TiO2对RP4接合转移的促进作用先升高再下降，其中1 mmol/L纳米TiO2干预下，24 h时接合转移频率达到最大值，为空白对照的1500倍，随后开始下降。15℃后差异不太明显。pH值对纳米TiO2 促RP4接合转移没有显著影响。 机研究发现：透射电镜结果表明纳米TiO2对细菌细胞膜产生影响细胞膜表面变得不光滑部分细胞膜发生溶解。纳米TiO2浓度高对细菌细胞膜影响越严重。大颗粒TiO2却类似的结果说明纳米TiO2的纳米结构是产生细胞膜损伤的主要因素。纳米TiO2对细菌细胞膜的影响为供受体菌的细胞膜融合和DNA跨膜转运了便利条件。纳米TiO2通过抑制korA和korB的mRNA表达激活了trbBp基因的mRNA表达进而促使供受体菌间形成“接合桥”促进了接合转移的第一个过程。纳米TiO2“接合桥”数量增加。同时纳米TiO2通过抑制korB和trbA的mRNA的表达激活了trfAp基因的mRNA表达促使RP4质粒的转移与复制促进了接合转移的第二个过程。 总的来说纳米TiO2能通过影响细菌细胞膜状态影响接合转移过程相关的调控基因mRNA表达而促进了接合质粒的接合转移。 纳米TiO2TiO2 可能会促进细菌耐药性在水环境中的传播，危害水环境安全，并有可能危害人类健康。。TiO2；细菌耐药性；接合质粒；接合转移 ABSTRACT The increasing problem of antibiotic resi