2基因表达分析.pptVIP

* * * * * 基因工程 实验技术篇 张革 中山大学药学院 zhangge@mail.susu.edu.cn 二、表 达 篇 据受体细胞的不同可分为： 1．原核表达系统： 常用有大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、链霉菌等； 2．真核表达系统：常用有酵母、丝状真菌、哺乳动物细胞等。 二．原核生物基因结构和表达特点 三．外源基因在原核表达系统中表达的必要条件： 删除内含子和5’非编码区 外源基因置于强启动子和SD顺序控制下 维持正确开放阅读框架（ORF） mRNA稳定且可有效转译，形成的蛋白质不被降解 四．影响外源基因在原核细胞中表达效率的因素： 常见原核强启动子： Plac：受Lac阻遏蛋白负调，受IPTG的诱导 Ptrp：取自大肠杆菌色氨酸操纵子。 Ptac :Lac启动子和Trp启动子的杂合启动子。 PL和PR启动子：噬菌体早期左/右向启动子，受λ噬菌体CI基因负调控。温度诱导。 T7和T5启动子： 核糖体结合位点： SD顺序与16srRNA3’末端互补程度。 AUG—SD间距离。 AUG后的核苷酸 类型： 融合型表达载体：----融合蛋白 非融合型表达载体：---天然完整蛋白 分泌型表达载体：----产物可跨膜分泌至胞周间隙 （一）非融合型表达载体 P SD Foreign DNA 非融合型表达载体 非融合基因 主要元件：强启动子，SD， ATG：第一个密