3. 酶化学分析.pptVIP

第六节 酶的分离纯化及其活性测定 注意事项 尽量减少酶活性的损失；低温 0～5℃，有机溶剂：-15～-20℃；抽提液加入EDTA（络合金属）；抽提液加入巯基乙醇（防止-SH氧化，使酶失活）；不能过度搅拌，以免产生大量泡沫，使酶变性；测定酶的比活力，使比活力升高。酶易失活，不可烘干。通常先透析出去小分子，浓缩，结晶或冷冻干燥制成干粉保存于冰箱。如果是酶液，与等体积甘油混合，并适当加入竞争性抑制剂-20℃长期保存。 分离纯化 活性测定 目的 过程与方法 注意事项 1 2 (1) (2) (3) 第六节 酶的分离纯化及其活性测定 酶活力： 指酶催化化学反应的能力。其衡量标准是酶促反应的速度。 所以酶活力测定就是酶促反应速度的测定 酶促反应的速度：在适宜条件下，单位时间内底物的消耗或产物的生成量。 活性测定 分离纯化 酶活力 反应初速度 测定方法 活力单位 实例 1 2 (1) (2) (3) (4) (5) 第六节 酶的分离纯化及其活性测定 酶促反应初速度 酶促反应速度在最初一段时间内保持恒定，随着反应时间的延长，酶反应速度逐渐下降。 其原因可能是： 底物浓度下降 ；酶在一定pH及温度下失活；产物对酶的抑制，产物上升而加速逆反应；反应体系中理化性质（pH、离子强度）的改变，会影响酶与底物的亲和性，以及辅助因子的可利用性等。因此，以