铜绿假单胞菌algL基因在毕赤酵母中表达其性质研究.docVIP

铜绿假单胞菌algL基因在毕赤酵母中的表达及其性质研究 岳 明，丁宏标，乔 宇 （中国农业科学院饲料研究所生态饲料研究室，北京 100081） 摘要：【目的】通过构建毕赤酵母工程菌株，以期获得重组海藻酸裂解酶，并对其性质加以研究。【方法】采用PCR的方法，以铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）基因组DNA 为模板，克隆出约1.0kb的海藻酸裂解酶基因algL的成熟蛋白编码序列，并将其插入巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）表达载体pPIC9K中，获得重组质粒pPIC9K-algL。重组质粒线性化后用聚乙二醇（PEG）法导入毕赤酵母菌株GS115中表达。【结果】用甲醇诱导培养基进行摇瓶发酵，表达得到40 kD的目的蛋白，酶活力达540 U·ml-1左右。经测定，该重组酶的最适反应pH为8.5，最适反应温度为40℃，并且在20～45℃，pH 3.0～12.0具有较好的稳定性。50 mmol·L-1的Co2+和Ca2+对酶活力均有显著的促进作用，Zn2+、Cu2+和Fe2+在不同浓度下对酶活力均有不同程度的抑制作用。在重组酶的辅助作用下，抗生素的抑菌效果明显提高。【结论】用重组毕赤酵母可高效表达外源海藻酸裂解酶，为其今后在工农业中的应用奠定了基础。 关键词：海藻酸裂解酶；毕赤酵母；海藻寡糖；诱导表达 Expression of Pseudomo