2015微生物菌种分离重点.pptVIP

CMCC(F)98003 标准菌株CMCC(F)98003保藏于中国医学细菌菌种保藏管理中心。 2005年开始,CMCC(F)98003作为丝状真菌的代表菌株被《中国药典》(第8版)指定为标准菌株。 目前在公开的文献中, 未能检索到该菌株的分离和鉴定研究信息。 形态学鉴定 CYA培养基, 25°C培养7 d Biolog鉴定 生长浊度试验 ITS rDNA区序列分析 ITS4: 5?-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3? ITS5: 5?-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3? β-微管蛋白基因序列分析 Bt2a: 5?-GGTAACCAAATCG GTGCTGCTTTC-3? Bt2b: 5?-ACCCTCAGTGTAGT GACCCTTGGC-3? CMCC(F) 98003 黑曲霉 Aspergillus niger 反应体系： 100 μL, 10 × 扩增缓冲液10 μL; DNA模板1 μL ; dNTP (每种2.5 mmol/L) 8 μL; 引物(10 μL/L)各2.5 μL; Taq DNA聚合酶(2.5 U/μL)1.3 μL; 无菌超纯水补足总体积100 μL。 反应程序： 94°C 5 min; 94°C 1 min, 55°C 1 min, 72°C 1 min, 30个循环; 72°C 10 min, 4°C保存。 形态学鉴定 图 25°C培养7 d菌种的宏观形态和显微形态 Fig Macromorphology and micromorphology on 25°C, 7 d 注: A菌落形态; B: 分生孢子梗形态(× 100); C: 分生孢子形态(× 400). Note: A: Colony morphology, B: Conidiophore morphology (× 100); C: Conidial morphology (× 400). CMCC(F) 98003 黑曲霉 Aspergillus niger 该菌株的形态学特征符合黑曲霉A. niger的形态特征 Biolog鉴定 注: ?: 没有生长; +: 生长旺盛; w: 微弱(边界)生长; v: 可变. Note: ?: No growth; +: Strong growth; w: Weak growth; v: Varied growth. CMCC(F) 98003 黑曲霉 Aspergillus niger 表 碳源利用情况 Table Carbon Source Utilization 碳源 Carbon source ATCC16888 Aspergillus niger ATCC16404 Aspergillus brasiliensis CMCC(F)98003 麦芽糖 Maltose + ? + β-甲基-D-葡萄糖苷 β-Methyl-D-Glucoside + ? + D-海藻糖 D-Trehalose + ? + L-苹果酸 L-Malic Acid v + ? α-酮戊二酸 α-Ketoglutaric acid ? w ? 苦杏仁苷 Amygdalin + ? + D-果糖 D-Fructose + v + ITS rDNA区序列分析 图 CMCC(F)98003的ITS rDNA区序列和β-微管蛋白基因序列PCR扩增结果 Fig ITS rDNA and β-tubulin gene PCR amplification results of CMCC(F)98003 注: M: DL2000 marker; 1: ITS rDNA区PCR扩增结果; 2:β-微管蛋白基因PCR扩增结果. Note: M: DL2000 marker;1: ITS rDNA PCR amplification result ; 2:β-tubulin gene PCR amplification result. CMCC(F) 98003 黑曲霉 Aspergillus niger 表 ITS序列特殊位点碱基差异 Table Difference of base position in ITS sequence 碱基位点 Base position 140 166 172 173 Aspergillus brasiliensis IMI 381727 C C T C Aspergillus niger ATCC 16888 A T A A CMCC(F)98003 A T A A 注: 以18S和ITS1区之间的TTACCG序列中的第一个“C”为1位点. Note: The first C in the border sequence (TTACC