2016生物一轮复习32基因工程重点.pptVIP

方法2、利用PCR技术扩增目的基因 3.人工合成基因法 有两种方法：　　　 ①直接合成法：根据蛋白质的氨基酸顺序推算出信使RNA核苷酸顺序，再据此推算出基因DNA的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。通过DNA合成仪直接合成目的基因 ②逆转录法：以信使RNA为模板，在逆转录酶的作用下将脱氧核苷酸合成合成DNA(基因)。 3、如果不知道目的基因的核苷酸序列，可采用_________________ 获取目的基因的三种方法应用 1、如果知道目的基因两端的核苷酸序列，而且基因比较大，可采用____________ 2、如果知道目的基因的序列，而且基因比较小，可采用________________ PCR技术扩增 化学方法人工合成 构建基因文库的方法 步骤二：基因表达载体的构建——基因工程的核心 1 目的： 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 2 组成： 目的基因+启动子+终止子 +标记基因等 表达载体的组成 启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，RNA聚合酶识别和结合的部位 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录 标记基因：鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来 基因表达载体的构建过程 质粒 DNA分子 限制酶处理 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 一个切口 两个黏性末端 用同种限制酶分别切割目的基因和质粒，使之露出相同的黏性末端，再加入DNA连接酶 步骤三、将目的基因导入受体细胞 1 转化： 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞 内维持稳定和表达的过程。 2 常用的受体细胞： 大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌 和动植物细胞等。 方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——制备感受态细胞（Ca2+处理细胞） 3 目的基因导入受体细胞的方法： 1、目的基因导入植物细胞的方法 （1）农杆菌转化法 ①农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植 物，对大多数单子叶植物没有感染能力。 ②原理：Ti质粒上的T---DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。 三、目的基因导入受体细胞 构建基因表达载体 转入 农杆菌 植物细胞 导入 稳定维持和表达 ③过程： 1、目的基因导入植物细胞的方法 （2）基因枪法：目的基因导入单子叶植物细胞 ①操作方法：利用压缩气体产生的动力 ，将包裹在金属粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。 ② 钨粉粒子和金粉粒子，粒子的直径一般在0.6～4um 。 ③适用：单子叶植物 1、目的基因导入植物细胞的方法 （3）花粉管通道法：将目的基因导入植物细胞 ①操作方法：在植物花受粉后，花粉形成花粉管还末愈合前期，剪去柱头，然后，滴入DNA（含的基因）使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞 ② 特点:十分简便经济。 ③例：转基因抗虫棉 2、将目的基因导入动物细胞 方法：显微注射法 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 转基因受精卵 转基因动物 3、将目的基因导入微生物细胞 ①微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 ②常用菌：大肠杆菌 ③常用法：Ca2+处理获得感受态细胞 ④过程： Ca2+处理 大肠杆菌 感受态 细胞 感受态细胞 吸收DNA 表达载体 与感受态 细胞混合 四、目的基因的检测与鉴定 导入过程完成后，全部受体细胞都能摄 入重组DNA分子吗？ 1 真正能摄入重组DNA分子的受体细胞很少。 2 目的基因进入受体细胞后，是否都能稳定维持和表达？ 不一定，需要检测 * * * * 从苏云金杆菌中提取毒蛋白，注入某种动物体内，从动物血清中分离出相应抗体，并用荧光标记该抗体。 然后，用标记的抗体与抗虫棉的细胞提取液混合。 如果出现杂交带，则说明抗虫基因已在棉花细胞中表达。 2016生物一轮复习第32讲 基因工程专题 又叫基因拼接技术或DNA重组技术。指在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞，并使重组基因在受体细胞中表达，产生人类需要的基因产物的技术。 一、 什么是基因工程 基因工程，又叫DNA重组技术。是指按照人们的愿望，在DNA分子水平上进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 获得人类所需的基因