第12章分子研究技术重点.docVIP

第章 分子生物学技术 名词解释 1. 分子克隆 2. 载体 3. 转化 4. 感染 5. 基因工程 6. 转导 7. 转染 8. DNA变性 9. DNA复性 10. 退火 11. 筑巢PCR 12. 原位PCR 13. 定量PCR 14. 基因打靶 15. DNA芯片 16. 反义核酸技术 17. 核酸探针 二、 2．ECORⅠ限制性内切酶的识别和切割的核苷酸序列为　　　　 。 　　　　　　 A、　5’-G↓AATTC -3’　 B、5’-TTT↓AAA -3’　 　　　　　　　　　3’-CTTAA↑G -3’　　　　3’-AAA↑TTT -3’　 　　　　　　 C、　5’-AG↓CT-3’　　　　D、5’-GGGCC↓C -3’ 　　　　　　　　　3’-TC↑GA -3’　　　　　3’-C↑CCGGG -3’　　　　　考查点 ：　 限制性内切酶的切割。 课本内容：　 A为E.COR I的切割位点。B为Dra I的切割位点。C为Alu I的切割位点。D为Apa I、banⅡ、Bsp1266的切割位点。 答案：　 A 3．基因工程生产产品的主要优点为　　　　　 。 　A、生产方法简单，成本低廉　　B、能生产较稀少的药用蛋白，满足人类需要 　　　 C、是利用天然微生物生产的，没有毒性　　　 D、A+B+C 考查点 ：　基因工程的优越性。 答　　案：　D、A+B+C 四、是非题 1．用pUC质粒作克隆载体克隆DNA时，人们用显色法筛选重组质粒，即在有IPTG和X-gal的平板上，显示白色的菌落含有原始质粒，而显示蓝色的菌落含有重组质粒。（　） 2．在PCR反应中，对于短的寡核苷酸，退火温度可用下式计算：Tm=2(A+T)+4(G+C) 。（ 　） 五、简答题 1. 基因敲除的基本程序？ 2DNA芯片的原理？ 3PCR的反应条件？ 4分子克隆中常用的工具酶及良好载体的条件？ 5. 蓝-白筛选的原理？ 6. SANGER双脱氧链终止法的原理？ 7. 核酸分子杂交的原理？ 8. 影响杂交的因素？ 9. 探针的种类和优缺点？ 10. 探针的标记法？ 11PCR的基本原理？ 12PCR引物设计的基本要求？ 13. 对天然质粒的人工构建主要表现在哪些方面？ 14. 基因文库的构建对重组子的筛选举出3种方法并简述过程。 15. 16. 基因工程载体种类特点？ 17. 基因芯片的原理和方法？ 18．对天然质粒的人工构建主要表现在哪些方面？ 19．举例说明差示筛选组织特异cDNA的方法？ 20．杂交瘤细胞系的产生与筛选？ 21. 典型的DNA重组实验通常包括哪些步骤？ 22. 基因文库的构建对重组子的筛选举出3种方法并简述过程。 23. 说明通过胚胎干细胞获得转基因动物的基本过程？ 24. 什么叫染色体步行法？利用什么原理进行的？简述之。 25. 若把一个基因亚克隆到载体上去，可能采取怎样的操作步骤？请简要加以描述。 六、论述题 1．列出5种常用的分子生物学技术并简述各自原理。 答案： 名解释 1. 分子克隆：在体外对DNA分子按照即定目的和方案进行人工重组，将重组分子导入合适宿主，使其在宿主中扩增和繁殖，以获得该DNA分子的大量拷贝。 2. 载体：能在连接酶的作用下和外源DNA片段连接并运送DNA分子进入受体细胞的DNA分子。 3. 转化：指质粒DNA或以它为载体构建的重组DNA导入细菌的过程。 4. 感染：以噬菌体、粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA分子，在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，才能感染适当的细胞，并在细胞内扩增。 5. 基因工程：有目的的通过分子克隆技术，人为的操作改造基因，改变生物遗传性状的系列过程。 6. 转导：指以噬菌体为载体，在细菌之间转移DNA的过程，有时也指在真核细胞之间通过逆转录病毒转移和获得细胞DNA的过程。 7. 转染：指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。 8. DNA变性：在物理或化学因素的作用下，导致两条DNA链之间的氢键断裂，而核酸分子中的所有共价键则不受影响。 9. DNA复性：当促使变性的因素解除后，两条DNA链又可以通过碱基互补配对结合形成DNA双螺旋结构。 10. 退火：指将温度降至引物的TM值左右或以下，引物与DNA摸板互补区域结合形成杂交链。 11. 筑巢PCR：先用一对外侧引物扩增含目的基因的大片段，再用内侧引物以大片段为摸板扩增获取目的基因。可以提高PCR的效率和特异性。 12. 原位PCR：以组织固定处理细胞内的DNA或RNA作为靶序列，进行PCR反应的过程。 13. 定量PCR：基因表达涉及的转录水平的研究常需要对mRNA进行定量测定，对此采用的PCR技术就叫定量PCR。 14. 基因打靶：是指通过DNA定点同源重组，改