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植物组织培养实验技术 北京林业大学 2015-5 实验五 继代培养 一 实验目的： 1、了解继代培养的方法 2、了解继代培养过程中易出现的问题 3、熟练掌握植物组织培养的操作方法 二 实验内容 继代培养中扩繁的方法 培养基成分及培养条件对继代培养的影响 试管苗增殖率的估算 （1）继代培养中扩繁的方法 a.切割茎段 b.分离芽丛 c.分离胚状体 d.分离根状茎 继代培养中材料的接种方式 a b c d （2）培养基成分及培养条件对继代培养的影响 1.苗分化数量少、速度慢、分枝少、个别苗生长细高 ??改进措施：增加细胞分裂素用量，适当降低温度，改善光照，改单芽继代为团块（丛芽）继代。 可能原因：细胞分裂素用量不足，温度偏高，光照不足。 2.苗分化过多，生长慢，有畸形苗，节间极短，苗丛密集，微型化 ??可能原因：细胞分裂素用量过多，温度不适宜。 3.分化率低,畸形,培养时间长时苗再次愈伤组织化 ??改进措施：减少或停用细胞分裂素一段时间，调节温度。 ??可能原因:生长素用量偏高,温度偏高。 ?改进措施：减少生长素用量，适当降温。 4.叶粗厚变脆 5.再生苗的叶缘、叶面等处偶有不定芽分化出来 ??可能原因：生长素用量偏高，或兼有细胞分裂素用量偏高。 ?改进措施：适当减少激素用量，避免叶片接触培养基。 可能原因：细胞分裂素用量偏高，或表明该种植物适于该种再生方式。 ??改进措施：适当减少细胞分裂素用量，或分阶段地利用这一再生方式。 6.丛生苗过于细弱，不适于生根或移栽 ?改进措施：减少细胞分裂素用量，免用赤霉素，延长光照时间，增强光照，及时转接，降低接种密度。 可能原因：细胞分裂素浓度过高或赤霉素使用不当，温度过高，光照短，光强不足，久不转移，生长空间窄。 7.幼苗淡绿，部分失绿 可能原因：无机盐含量不足，pH值不适宜，铁、锰、镁等缺少或比例失调，光照、温度不适。 改进措施：针对营养元素亏缺情况调整培养基，调好pH值，调控温度、光照。 ?改进措施：及时转接、降低接种密度，调整激素配比和营养元素浓度，改善瓶内气体状况，控制温度。 8.幼苗生长无力、发黄落叶、有黄叶、死苗夹于丛生苗中 可能原因：瓶内气体状况恶化，pH值变化过大，久不转接导致糖已耗尽，营养元素亏缺失调，温度不适，激素配比不当。 9.继代培养的植物材料玻璃化 可能原因：主要是由于培养容器中空气湿度过高，透气性较差造成。 改进措施： ①增加培养基中的溶质水平，以降低培养基的水势； ②减少培养基中含氮化合物的用量； ③增加光照； ④增加容器通风，最好进行CO2施肥； ⑤降低培养温度，进行变温培养； ⑥降低培养基中细胞分裂素含量，可以考虑加入适量脱落酸。 （3）试管苗增殖率的估算 y=xn y：年增殖率 x：每周期增殖的倍数 n：全年可增殖的周期数=365/每一周期的天数; 四、实验材料 需要继代增殖的蓝莓组培苗 蓝莓 （blueberry，Vaccinium ） 五、实验步骤 取出培养瓶中的植物材料，修剪去多余枝叶，切分成适当大小，并剪去根部接触培养基部分露出新鲜组织，插入继代培养基中，迅速盖上瓶盖； 将接好培养材料的培养瓶放入培养室培养。 （一）继代培养 每组制备500ml生根培养基，每人分装5瓶。 生根培养基配方： 金钻蔓绿绒：1/2 MS + NAA 0.3 蔗糖15g/L 琼脂6.0g/L pH6.2-6.4 （二）制备生根培养基 需要准备物品： 实验结束后，每小组将工具整理包扎好，放 回至各组实验台。 今次第二组值日，实验结束后清理接种室，综合实验室，走廊。 做完实验，每小组清理实验过程中的废弃物，清洁超净工作台 实验报告写上所在专业、学号