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- 2017-05-16 发布于湖北
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病毒(virus)既不属于原核生物,也不属于真核生物,因为它没有一般的细胞结构,它只能寄生在动物、植物和细菌的细胞内进行繁殖,它能使宿主细胞的机构转而合成它自身新的病毒物质。 根据宿主细胞的不同可将病毒分为动物病毒、植物病毒和细菌病毒三类。细菌病毒又称为噬菌体(bacteriophage,phage)。后来发现真菌及藻类都有病毒,这些病毒也称为噬菌体。 第二节 噬菌体的增殖和突变型 噬菌体可以快速扩增,因此缩短研究周期 在几毫升营养液中就可得到庞大的噬菌体群体,可能从中观察到极为罕见的遗传学现象 许多噬菌体基因组小,是一个复制子,就有可能详细的研究整个基因组结构和功能 各种不同类型的突变体,可进行突变实验,而且便于筛选 一、噬菌体的繁殖 根据噬菌体与宿主的关系可分为: 烈性噬菌体(virulent phages),这种噬菌体感染宿主细胞后就进入裂解反应,使宿主细胞裂解。 温和噬菌体(temperate phages),这种噬菌体感染宿主细胞后具有裂解和溶源两种发育途径。 2.温和噬菌体的感染周期 二、噬菌体的突变型 条件致死突变型 就是在某些条件下,这些突变型是致死的,那么这些条件就称为限制条件,而在另一些条件下仍可进行繁殖,从而得以扩增进行研究,所以这些条件为许可条件。 两大类条件致死突变: “温度敏感”突变(temperature sensitive mutation) “抑制因子敏感”突变(supporessor -sensitive mutation ,sus) 无义突变与无义抑制基因 如果编码多肽链中的某一密码子突变为终止密码子,多肽链的合成到此便会中断,从而使多肽链变短而失去活性,这种突变称为无义突变。各种无义突变都是条件致死突变,因为有相应的无义抑制基因。 第三节 噬菌体突变的重组实验 二、T4突变型的三点测交 三个基因的染色体图 一、互补测验与顺反子 凡是属于rⅡA的突变,相互之间不能互补; 凡是属于rⅡB的突变,相互之间也不能互补; rⅡA的突变和 rⅡB的突变之间可以互补。 说明:rⅡA和 rⅡB是两个独立的功能单位,分别具有不同的功能,但他们的功能又是互补的。 对于不同基因的互补测验中,不论是顺式还是反式排列均表现出互补效应; 但属于同一基因的不同位点的突变,则顺式构型表现互补,反式构型不能互补。 将不同突变之间没有互补的功能区称为顺反子。一个顺反子就是一个功能水平上的基因。 三、T4条件致死突变型的互补测验 基因内互补和基因间互补的区别: 1.任何两个不同基因间的突变总是互补的,而同一基因内不同位点突变绝大多数是不能互补的,只有少数例外; 2.基因内两个突变能互补也只能是点突变,无缺失,这种突变的功能效应一定是错义突变,绝不是无义突变或移码突变。 3.基因内互补作用的酶活性往往明显低于正常水平,同时所形成的蛋白质也有某种异常。 第五节 缺失作图 一、缺失作图原理 1.概念 点突变:由于核苷酸对发生了改变而产生的突变。 缺失突变:由于缺失了相邻的许多核苷酸对而产生的突变。 2.区别 (1)点突变是单个位点的突变,缺失突变是多位点的突变; (2)点突变可以发生回复突变,而缺失突变是不可逆的; (3)点突变与其他点突变之间可以发生重组,而缺失突变同另一个基因组内缺失区点突变之间不可能发生重组 3.原则:凡是能和某一缺失突变型进行重组的,它的位置一定不在缺失范围内;凡是不能重组的,它的位置一定在缺失范围内。 二、缺失作图方法 试验:0.5ml Ecoli.B培养物+1滴缺失型噬菌体+1滴待测rⅡ突变体,几分钟后,取1滴菌液在灭活纸条上,铺在Ecoli k(λ)平板上培养 结果: 有噬菌斑:表明发生了重组,判断突变不在缺失区; 无噬菌斑:表明未发生重组,判断突变在缺失区。 第六节 λ噬菌体的基因组与位点专一性重组 一、λ噬菌体的基因组 48500bp,线状DNA 主要特点: (1)功能相关的基因聚集在一起 (2)结构基因及其编码蛋白质所作用部位处在邻接区域 (3)具粘性末端 二、λ原噬菌体与合子诱导 原噬菌体是溶源性的决定者,位于染色体的特定位置上。 合子诱导(zygotic induction ):当Hfr品系和F- (不含l)的品系接合时,溶源化状的噬菌体从供体一旦进入受体,由于不受到CI蛋白的抑制而迅速进入裂解周期,使受体迅速破裂,释放大量噬菌体,此现象称合子诱导。 三、原噬菌体的整合与切除 λ噬菌体的整合和切除 位点专一性重组的核苷酸序列 第七节 环状排列与末端重复 二、环状排列与末端重复的形成 四、位点专一性重组的分子机制 一、线状DNA具有环状遗传图 * * 第
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