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2014细胞及细胞工程大实验 授课对象：生物工程 实验报告的基本要求 1、实验报告的六-七个部分：实验目的、实验原理、实验用品、实验方法、实验结果、实验分析、思考题及答案。 2、实验的结果要求真实、详细（在报告的右边留2-3厘米（对折），用于记录实验过程中观察到的现象）。 3、实验结果中，凡是有显微图片的，需要在图片下标明“图N *****的显微观察结果（物镜放大倍数X目镜放大倍数X ）”。 4、实验分析应该紧扣实验结果和原理，不能凭空分析，也不要漏掉重要的现象没有分析。 5、认真预习，在实验前对可能得到的实验结果有个明确的预测，实验过程中出现预料之外的现象时，条件许可时，应该重复实验。 6、注意事项等内容，可以记在笔记本或实验指导书上，不要写在实验报告上，避免报告中出现检讨式的结果或分析。 实验一 细胞的凝集反应 一、实验目的 了解细胞膜的表面结构； 二、实验原理 凝集素是一类可逆结合特异糖基的蛋白质，能与细胞外被的寡糖链相连接，使细胞发生凝集。 三、实验用品 1 ．器材: 显微镜、天平、载玻片、滴管、离心管、烧杯、10ml移液管、试管、试管架 2 ．材料: 土豆块茎、 2％ 鸡血红细胞 3 ．试剂: 抗凝血剂（ 3.8%柠檬酸钠）、PBS缓冲液（pH 7.4 0.2mol/L Na2HPO4 49ml + 0.2mol/L NaH2PO4 51ml, PBS缓冲液一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用）、0.17mol/L氯化钠。 四、实验步骤 1 ． ２％鸡血红细胞悬液制备 取己加抗凝剂的新鲜鸡血1 mL，加等量生理盐水轻轻混匀后2000 r/min离心５ min，重复4次，按红细胞压积用生理盐水配成２％鸡血红细胞悬液（淡红色）。 2 ．土豆凝集素制备 土豆２克切成薄片后加10 ml PBS，浸泡0.5-2 h 参考结果 一、实验目的 了解植物组织培养的基本原理，掌握培养基配制和消毒、植物材料的处理、接种等基本技术。 二、实验原理 　植物细胞的全能性 二、实验用品 超净工作台、培养架、镊子、解剖刀、酒精灯、脱脂棉、烧杯、广口瓶、培养皿。 20%次氯酸钠、70%酒精、无菌水、培养基母液。 　金盏菊的茎段与叶片 四、实验步骤 1、培养基配置： 诱导愈伤组织的培养基为：MS+2，4-D 0.5mg/L+NAA 1mg/L+6-BA 2mg/L 3%蔗糖+1.3%琼脂,pH 5.8。 2、叶片的消毒： 取幼嫩叶片用自来水充分洗净后，经75%酒精消毒30s, 20%次氯酸钠溶液浸泡8min，无菌水冲洗3-4次后，去掉主叶脉和大的侧叶脉，将叶片切成1.0-1.5cm2的小方块， 3、接种：用75%酒精擦洗接种台表面，解除三角瓶上捆扎的线绳，有必要的话可以用沾有75%的酒精的棉球把三角瓶表面擦一下，把三角瓶按培养基处理整齐排列在接种台左侧，然后。 4、注意事项：消毒以后的所有操作过程，都应在超净工作台上进行，操作所用的镊子、解剖刀和剪刀使用前插入75%乙醇溶液中，使用时在酒精灯火焰上炽烧片刻，冷却后再切割。轻轻打开封口膜，将三角瓶口在火焰上方灼热灭菌，同时把长镊子也放在火焰上方灼烧，将烧过的镊子触动培养基部分，使其冷却，以免烧死被接种的外植体，然后将培养皿打开一小缝，用镊子取出处理好的叶片，背面朝下放到培养基表面。在酒精灯火焰上转动三角瓶一圈使瓶口灼热灭菌。然后用封口膜封口，待所有人完成实验后，将其放入培养箱内进行培养，在培养箱内，分班做好标记（标记内容包括：班级名称、接种日期、接种数量、培养基类型等）。 注意： （1）从室外取得材料，要用自来水冲洗数分钟，对表面不光滑或长有绒毛等结构不容易洗净的材料，冲洗时间要长，必要时要用毛刷刷洗。 （2）外植体要选用两种消毒剂交替浸泡，初次实验灭菌时间要设置一定的时间梯度来确定最佳的灭菌时间。常用的消毒剂的见表1。 （3）工作台接种时，应尽量避免做明显扰乱气流的动作（比如说、笑、打喷嚏），以免影响气流，造成污染。且操作过程中要不时用75%的酒精擦拭双手。 （4）接种前培养基出现大量污染现象要区分原因。 （5）接种后培养基出现大面积污染、菌落分布不匀，主要是接种过程中发生的污染所致。可能是接种室不洁净、菌类孢子过多、镊子带菌、操作人员手未彻底消毒、操作人员呼吸及超净工作台出现故障等原因引起。应保持无菌接种室洁净，并定期用甲醛等熏蒸灭菌；在接种前无菌室用紫外灯灭菌时间不低于20-30 min；用75%酒精喷雾杀菌降尘，超净台开启15-20 min后方可使用；镊子等接种工具严格彻底灭菌，且接种时使用1次灭菌1次；操作过程中经常用75%酒精等消毒剂擦洗手部等措施。 （6）接种后外植体周围发生菌类污染可能因外植体表面灭菌不彻底所致。解决方法是:外植体用饱