2015-2016学年 5.3《血红蛋白的提取和分离》课件.pptx

;1.说出从血液中初步获取血红蛋白的原理和方法； 2.说明凝胶色谱法的原理和方法； 3.说出电泳的基本原理和方法； 4.运用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离纯化。; 以“蛋白质的合成”为背景材料，设计问题，导入新课；首先直接阐明蛋白质提取与分离的依据和原理，接着介绍凝胶色谱法的概念，原理及使用方法；再讲解缓冲溶液的概念，作用；电泳的概念，原理和类型；然后重点讲解血红蛋白的提取和分离过程及注意事项；最后通过课堂总结及课堂检测，完善内化课堂知识。 首先通过图片了解血红蛋白的组成，再以鸡血细胞为例，通过洗涤红细胞，释放血红蛋白，分离血红蛋白，透析血红蛋白等一系列实验步骤详细了解具体实验，通过实验提高学生的实际动手能力，并通过实验更好的理解蛋白质提取与分离，为以后的学习打下良好的基础。;蛋白质的合成;一、基础知识;1.方法及原理;; 洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液， 促使蛋白质分子的差速流动。 ;相对 分子质量;缓冲溶液;还记得人体血液中的缓冲液吗？;1、概念：指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。 2、原理： ①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上正电或负电。 ②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。 ③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。;3、类型：琼脂糖凝胶电泳、 聚丙烯酰胺凝胶电泳 十二烷基硫酸钠（SDS）—聚丙稀酰胺凝胶电泳 应用：测定蛋白质分子量、进行蛋白质纯度鉴定 原理：蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。 SDS：消除净电荷对迁移率的影响。;二、实验操作－－实验步骤;血红蛋白的组成;;1.洗涤红细胞;2.释放血红蛋白;;;纯化－－凝胶色谱操作;步骤;色谱柱内不能有气泡；装完后，立即用缓冲液洗涤，平衡凝胶使凝胶装填紧密。;样品的加入和洗脱;;1. 红细胞的洗涤： 洗涤次数不能过少；低速、短时离心。 2.色谱柱的装填： 装填尽量紧密，降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。 3. 凝胶的预处理： 沸水浴法时间短，还能除去微生物和气泡。 4. 色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动。;血红蛋白的提取和分离;1.随着人类跨入蛋白质组时代，对蛋白质的研究和应用越来越深入，首先要做的一步是（ ） A.弄清各种蛋白质的空间结构 B.弄清各种蛋白质的功能 C.弄清各种蛋白质的合成过程 D.获得高纯度的蛋白质;2.使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于（ ） A.电荷的多少 B.分子的大小 C.肽链的多少 D.分子形状的差异;3.用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是（ ） A.相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子 质量较大的蛋白质 B.相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子 质量较大的蛋白质 C.相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子 质量较大的蛋白质 D.二者根本无法比较;4.在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是（ ） A.调节pH B.维持红细胞的能量供应 C.防止微生物生长 D.防止血液凝固;6.下列是有关血红蛋白提取和分离的相关操作，其中正确的是（ ） A.可采集猪血作为实验材料 B.用蒸馏水重复洗涤红细胞 C.血红蛋白释放后应低速短时间离心 D.洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液