酶工程第四章酶的提取与分离纯化总结.ppt

* 电泳胶实例 * 四、等电聚焦 ( isoelectric focusing，IEF ) 利用蛋白质具有不同等电点的特性，以聚丙烯酰胺为电泳支持物，在其中加入载体两性电解质（商品名：Ampholine，一种含有各种连续 pI 的小分子混合物）的电泳方法称聚丙烯酰胺等电聚焦电泳（IEF）。 * 1. 原理 两性电解质载体在电场作用下，按各自pI形成从阳极到阴极逐渐增加的平滑和连续的pH梯度。蛋白质在此pH梯度凝胶中泳动，当迁移至pH值等于pI处时不再泳动，被浓缩成狭窄的区带。 * 两性电解质载体(carrier ampholytes) (1)易溶于水，有足够的缓冲能力——以便保 持稳定的pH梯度。 (2)导电性能好——以保持电场强度的均匀性。 (3)分子量小——电泳后易分离除去。 (4)化学组成不同于蛋白质——不干扰测定。 * 等电聚焦电泳 * 2. 操作： 1）凝胶 配制：凝胶浓度T为5％~7.5％（C=3% 左右） 2）加样：任意位置 * 3）电泳： 阳极：磷酸溶液 电极溶液 阴极：NaOH溶液 只有在凝胶两端给予高电压（600V）时，才