酶工程实验讲义最终稿总结.ppt

凝胶层析的基本概念 外水体积（Vo） 内水体积（Vi） 基质体积（Vg） 柱床体积（Vt） 洗脱体积（Ve） 凝胶层析中的各种体积： 外水体积（Vo）：层析柱中凝胶颗粒周围空间的体积，也就是凝胶颗粒间流动相的体积。 内水体积（Vi）：凝胶颗粒中孔穴的体积，凝胶层析中固定相体积就是指内水体积。 基质体积（Vg）：凝胶颗粒实际骨架体积。 柱床体积（Vt）：凝胶柱所能容纳的总体积。 Vt＝Vo＋Vi＋Vg 洗脱体积（Ve）：指将样品中某一组分洗脱下来所需洗脱液的体积。 Kd是分配系数：用于衡量物质在凝胶内外的分配率，是凝胶层析的一个特征常数，只与被分离物质分子大小和凝胶孔径大小有关，与层析柱的长短粗细无关。 Kd值的计算：Kd=(Ve-Vo)/Vi 几个特征Kd值意义： 　　　①Kd=0,则Ve=Vo ，全排阻； 　　　②Kd=1,则Ve=Vo+Vi , 全渗入； 　　　③0＜Kd1,则Ve=Vo+Kd×Vi，部分渗入； 　　　④Kd1，则VeVo+Vi， Sephadex对它们有吸附作用。如某些芳香族化　　　　　 合物（Phe,Tyr,Trp等）， 优点： a. 条件温和 b.操作简便 c. 损失少回收率高 d. 层析柱可反复使用 凝胶的类型： Sephadex: 交联葡聚糖 Sepharose：琼脂糖凝胶 Bio