2015年高考一轮微生物的培养与应用.ppt

【典例精析】 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 【例6】尿素是一种高浓度氮肥且长期施用没有不良影响，但尿素只有通过土壤中某些细菌分解为氨后，才能被植物吸收利用。分解尿素的细菌都能合成脲酶，脲酶能催化尿素水解。某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下： 2.间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。 ⑵常用方法：稀释涂布平板法。 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。 某同学在稀释倍数为106 的培养基中测 得平板上菌落数的平均数为234，那么 每克样品中的菌落数是（涂布平板时所 用稀释液的体积为0.1ml） ( ) A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4 B 对点训练 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 (3)注意事项 说明设置重复组的重要性。在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。 三、设置对照 判断培养基中是否有杂菌污染： 将未接种的培养基同时进行培养。 判断选择培养基是否具有筛选作用： 完全培养基（营养成分齐全）接种后培养 观察菌落数目。 主要目的是排除实验组中非测试因素对实验 结果的影响，提高实验结果的可信度。 设置对照的作用： 实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。 原因： ⑴土样不同 ⑵培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质) 如何设置对照： 小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。 方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验 方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。 考点四　筛选菌株、统计菌落数目、设置对照 【回扣教材】 1．筛选菌株 (1)自然界筛选： 实例：DNA多聚酶链式反应(PCR)要求使用____________________________酶。科学家从水生耐热细菌Taq中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶。 耐高温的DNA聚合 方法：根据目的菌对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 (2)实验室中筛选： 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括_______、_______、______等)，同时_______或_______其他微生物生长。 (3)选择培养基 在微生物学中，将允许_______种类的微生物生长，同时抑制或阻止_________微生物生长的培养基，称作_________培养基。 营养 温度 pH 抑制 阻止 特定 其他种类 选择 2．统计菌落数目 测定微生物数量的常用方法有________________法和____________________法。 3．设置对照 (1)设置对照的主要目的是排除__________中_______________对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 (2)判断培养基中是否有杂菌污染： ___________________________________________。 (3)判断选择培养基是否具有筛选作用： ____________________________________________。 稀释涂布平板 显微镜直接计数 实验组 非测试因素 将未接种的培养基在相同的条件下进行培养 对照培养基(营养物质齐全)接种后培养观察菌落数目 【典例精析】 【例5】自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。 实验步骤： (1)制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。 (2)为了得到更加准确的结果，你选用______________法接种样品。 (3)适宜温度下培养。 稀释涂布平板 结果分析： (1)测定大肠杆菌数时，在对应稀释倍数为106的培养