大肠杆菌、质粒和噬菌体.pptVIP

转化（transformation） ◆ 重组分子导入适宜的宿主细胞的过程就是转化。 ◆ 宿主细胞也称为受体细胞，分为原核细胞和真核细胞两类。 ◆ 原核细胞以大肠杆菌为主，真核细胞包括酵母及动物细胞等。 ◆ 在基因克隆技术中，转化特指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入宿主细胞的过程。通过宿主细胞的复制而使目的基因得到大量的扩增。  转化及感受态细胞 ★ 目前常用的原核细胞转化方法有两类： 电穿孔转化法、化学转化法 ★ 电穿孔转化法属于物理方法，但由于受到仪器的限制，实验室更常用的是化学转化法。 ★ 化学转化法原理： （1）低温（0℃）和CaCl2低渗溶液处理，使宿主细胞处于容易吸收外源DNA的状态，即感受态。菌体膨胀成球形，细胞壁和膜通透性增强。 （2）DNA与Ca2+形成的羟基-磷酸钙复合物黏附于菌体表面，42℃短暂热冲击处理（热休克）后，黏附表面的重组DNA被吸收进入宿主细胞。 （3）在营养丰富的培养基上生长1小时左右，细胞形态复原，进入增殖分裂期。 挑取单菌落，接种无抗菌素的LB培养基，37℃摇床培养过夜。 次日按1：100转种新鲜LB培养基，继续摇床培养2小时左右，至菌液OD 600nm值为0.4-0.6时停止培养。 置冰上预冷10分钟，然后4℃、5000rpm离心10分钟，弃上清； 以10ml冰预冷的0.1mol/L CaCl2重悬