河南科技大学微生物工程学课件第二章菌种2、3节.pptVIP

2.培养分离中要解决的问题 “分离什么和从哪里分离出?” 必须充分考虑所分离微生物的生产能力、生长速度、生物群体培养和产品生产工艺及其提纯的难易和费用，工业生产发酵罐中稳定性及遗传操作的难易程度等。 选择适宜的培养分离方法和检测方法。 一）诱变育种的一般步骤 原始菌株（出发菌株） 细胞或孢子悬液制备 活细胞计数 诱变剂处理 活细胞计数 中间培养 突变株分离 初筛 复筛 生产性能试验 诱变预备处理 诱 变 育 种 的 工 作 程 序 1、出发菌株的选择 选择时注意以下几点： 1）选择对诱变剂敏感性强、变异幅度大的菌株作为出发菌株。 2）最好选用已经过选育的自发突变菌株。 3）采用具有有利性状的菌株作为亲本，如生长速度快，营养要求低等。 4）由于有些菌株在发生某一变异后会对其它诱变因素的敏感性提高，故有时可考虑选择已发生其它变异的菌株作为出发菌株。例如，在金霉素生产菌的诱变中，失去（黄色）色素的变异菌株作为出发菌株则产量会不断提高。 2、单细胞（或单孢子）悬液制备 一般均采用生理状态一致的单细胞或单孢子悬液进行诱变处理。 因为 1）分散状态的细胞可均匀地接触诱变剂 2）可避免长出不纯的菌落。 ? 霉菌的菌丝一般是多核的，所以对霉菌的处理一般应采用孢子悬浮液。 3、诱变剂及使用剂量的选择 凡能引起生物体遗传物质发生变异的因素，统称诱变剂。 如紫外线、X-射线、Co60、?-射线、快中子、超声波，等离子等 硫酸二乙酯(DES)、亚硝基胍 (NTG)、 亚硝酸(NA)、氮芥(NM)、羟胺、ICR类等 诱变剂 物理诱变剂 化学诱变剂 * 第二节 菌种来源 Chapter 1 continued 一、分离与筛选的设计要求 1.在筛选所需菌株时应考虑以下一些重要指标： 1、菌的营养特征 一般要求采用廉价的培养基或使用来源丰富的原料 2、菌的生长温度(较高温) 3、菌的稳定性(连续几代) 4、菌的产物得率和产物在培养液中的浓度 5、菌对所采用的设备和生产过程的适应性 6、容易从培养液中回收产物 3-6是用来衡量菌种的生产性能，如能满足这几条，便有希望成为效益高的生产菌株 1.菌种分离的一般过程(引入选择压力) 样品的采取 → 预处理 → 富集培养 → 菌落的选择 → 产品的鉴定 目的：高效地获取一株高产目的产物的微生物 二、菌种分离与筛选工作程序 三、含微生物样品的采集 较复杂；应根据分离目的灵活掌握 土壤（丰富、 5-25cm、土质、酸碱度、植被状况、地理条件、季节） 食品 、海水、动物、植物、极端环境 根据微生物的营养类型采样 森林土中有相当多枯枝落叶和腐烂的木头，富含纤维素，适合利用纤维素作碳源的纤维素酶产生菌生长。 肉类加工厂附近、饭店排污沟，易分离到蛋白酶和脂肪酶产生菌。 面粉加工厂等场所易分离到产淀粉酶、糖化酶的菌 根据微生物的生理特性采样 筛选高温酶产生菌通常从温泉、火山爆发处、堆肥等采样； 筛选产低温酶的微生物，可从冰窖、南极、深海等采样 分离耐高渗透压酵母菌，可到甜果、蜜饯、甘蔗渣堆积处采样 杨尺蠖 赤松毛虫 侧柏毛虫 四、含微生物样品的富集培养 富集(enrichment)培养 是在目的微生物含量较少时，根据微生物的生理特点，设计一种选择性培养基，创造有利的生长条件，使目的微生物在最适的环境下迅速地生长繁殖，数量增加，由原来自然条件下的劣势种变成人工环境下的优势种，以利分离到所需的菌株。 ? 其要领是提供一些有利于所需菌株生长或不利于其他菌型生长的条件，例如，供给特殊的基质或加入某些抑制剂。 控制氧可将好氧微生物和厌氧微生物分开； 高温下培养可将嗜热微生物和非嗜热微生物分开； 控制pH可分离嗜酸或嗜碱微生物； 高糖或高盐培养基可分离耐高渗透压微生物； 在分离培养中加入抗生素或某试剂可增加选择性 如分离真菌可在土豆培养基中加入链霉素； 分离细菌或放线菌可在培养基中加入制霉菌素等 ? 重复移植几次后接种少量已富集的培养物到固体培养基上。 ? 移植时间是关键，应在所需菌种确已占优势的情况下进行。 五、利用固体平板的生化反应进行分离 （方法之一） ? 利用特殊的分离培养对大量混杂微生物进行初步分离的方法。 ? 分离培养基是根据目的微生物特殊的生理特性或利用某些代谢产物生化反应来设计的。 ? 可显著提高分离效率 透明圈法 变色圈法 生长圈法 抑菌圈法 1、透明圈法 ? 分离水解酶产生菌时较多采用，如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、核酸酶等； ? 在平板培养基中加入溶解性较差的底物，使培养基混浊； ? 能分解底