色谱法()重点剖析.pptVIP

对内标物的要求： 1）内标物应是样品中不存在的纯物质。 2）内标物与被测物的峰尽量靠近，但又能完全分开，tR相差少。 优点：定量准确，操作条件不必严格控制，与进样量无关，被测组分和内标物出峰即可，适用于微量组分的测定，应用广泛。 缺点：寻找合适的内标物；且每次测定都要准确称量样品和内标物。 （3）外标法—标准曲线法 当样品中各组分不能完全流出，又没有合适内标时，可采用此法。 ● 将待测组分的纯物质配制不同浓度的标准系列； ● 在相同操作条件下，定量进样，测得A或h ； ● 绘制A—c曲线或h —c曲线。 ● 完全相同条件下，测待测样品，根据A待或h， 从曲线上查出待测组分含量。 优点：操作简单，计算 方便，不用fi。 缺点：要求准确进样， 操作条件稳定。 A(h) c A待 C待 § 11-4、色谱法的基本理论 塔板理论 —— 热力学 速率理论 —— 动力学 （1）塔板理论 1941年，Martin 和Synge提出塔板理论。 色谱柱比作一个分馏塔； 柱中存在n个塔板，塔板高度为H； 组分在两相间迅速达到分配平衡； 流动相以不连续的脉动方式加入。 H 色谱过程 ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● 固定相 流动相 1 2 3 4 5 6 H ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● 色谱流出曲线的数学模型，成功解释了色谱峰的形状。 C = n? m (2π)? Vr · exp 〔 〕 - n 2 ﹙ ﹚ 1- V Vr 2 在实际色谱柱中，n值很大（约为106～ 109 ）。所以色谱峰一般为正态分布。 柱效能指标：理论塔板高度H，理论塔板数n 色谱柱的分离能力（叫柱效能）的大小主要与塔板的数目有关，塔板数越多，柱效能越高。 柱长为L的色谱柱： 色谱柱：H↓ ，n↑，柱效越高，分离效果越好。 塔板数的计算公式： 式中：tR组分的保留时间；W1/2组分色谱峰的半宽度； W为色谱峰的峰底宽度。 柱子的塔板数与峰宽和保留时间有关。保留时间越大，峰越窄，塔板数就越多。柱效能也就越高。 有效塔板数 n有效，有效塔板高度 H有效 n有效，H有效 用tR’代替保留时间tR, 扣除了死时间tM的影响，真正反映色谱柱的柱效。 导出了色谱流出曲线的数学模型，成功解释了色谱峰的形状，呈正态分布。 塔板理论： 提出柱效能评价指标：塔板高度 H，塔板数 n 色谱柱：H↓ ，n↑，柱效越高，分离效果越好 无法指出动力学因素对柱效的影响 （2）速率理论 1956年，van Deemter 提出色谱的动力学理论 van Deemter 方程式： A — 涡流扩散项 B/u — 分子扩散项 Cu — 传质阻力项 从动力学角度解释了影响分离的各种因素； A — 涡流扩散项 固定相的不规则性，使组分分子路径不同 ● ● B/u — 分子扩散项 浓度梯度引起组分分子向两边纵向扩散 A＝2λdp B＝2γD Cu — 传质阻力项 组分分子达到分配平衡的速率引起 Ｃ＝Ｃm +Cs Cm —流动相传质阻力系数 Cs -—固定项传质阻力系数 影响柱效的因素： ●固定相填充均匀度 ●固定相颗粒大小 ●固定相厚度 ●流动相的状态 ●流动相流速 —— 对选择操作条件具有指导意义 两峰间距离由组分在两相间的分配系数决定——与色谱过程的热力学性质有关。 峰的宽或窄由组分在色谱柱中传质和扩散行为决定——与色谱过程的动力学性质有关。 色谱的分离过程 —— 热力学和动力学两方面 ① 分离效果差，柱效低， 选择性低 ② 完全分离，柱效高， 峰窄，选择