生物医学工程前沿之疾病治疗3基因疗法重点剖析.pptx

《生物医学工程前沿》 主讲教师 涂秋芬; 第一章 绪论 第二章 生物医学检测与疾病诊断 第三章 疾病治疗 §1 药物治疗 §2 细胞疗法 §3 基因疗法 §4 介入疗法 第四章 组织工程与人工器官 §1 生物材料 §2 种子细胞 §3 生物反应器 §4 3D打印技术;一：概论 二：基本原理——“基因工程” 三：人类遗传疾病的基因疗法 四：现状及存在问题;一：基因疗法概论;（二）分类;根据治疗策略分类： 1、基因置换：用正常的基因原位置换病变细胞内的致病基因（等位基因）。 2、基因修复：将致病基因的突变碱基序列定点纠正，可用来治疗点突变导致的疾病。 3、基因增补：将目的基因导入患者体内，补偿缺陷细胞的功能，可用于隐性遗传病的治疗。 4、基因失活：利用反义技术特异性封闭、抑制有害基因表达，可用于一些显性遗传病或肿瘤的基因治疗。 ;（三）发展历史;（三）发展历史; 世界第一个基因治疗药物;;中国;二：基因疗法的基本原理——基因工程;操作环境;你身边的基因工程;食用油 ;杂交=基因工程？;Two breakthroughs—Imitation eggs made of soybeans and imitation soybeans made of eggs ;Congratulations--You are the first victim of recombinant DNA ;I hope theres nothing genetically modified in this ;兴奋;（1）DNA是遗传物质： 不同基因具有相同的物质基础。地球上的一切生物，从细菌直至人类，它们的基因都是一个具有遗传功能的特定核苷酸序列的DNA片段。而所有生物的DNA的基本结构都是一样的。因此，不同生物的基因（DNA片段）原则上是可以重组互换的。 ; （2）DNA双螺旋结构： 1953年James D. Watson和Francis H. C. Crick揭示了DNA分子的双螺旋结构和半保留复制机制。 ;（3）中心法则，遗传密码 　　遗传密码是通用的。一系列三联密码子（除极少数的几个以外）同氨基酸之间的对应关系，在所有生物中都是相同的。重组的 DNA分子不管导入什么样的生物细胞中，只要具备转录翻译的条件，均能转译出原样的氨基酸。即使人工合成的DNA分子（基因）同样可以转录翻译出相应的氨基酸。现在，基因是可以人工合成的。 ;（4）基因可切割 　　基因直线排列在DNA分子上。除少数基因重叠排列外，大多数基因彼此之间存在着间隔序列。因此，作为DNA分子上一个特定核苷酸序列的基因，允许从DNA分子上一个一个完整地切割下来。即使是重叠排列的基因，也可以把指定的基因切割下来，尽管破坏了其他基因。;（5）基因可转移 　　基因不仅是可以切割下来的，而且发现生物体内有的基因可以在染色体DNA上移动，甚至可以在不同染色体间进行跳跃，插入到靶DNA分子之中。由此表明基因不仅是可转移的。 （6）基因通过复制把遗传信息传递 　　经重组的基因一般来说是能传代的，可以获得相对稳定的转基因生物。 ;①从细胞中分离出DNA;1、提取目的基因的方法——鸟枪法;1、提取目的基因的方法--基因合成法;What is PCR? : polymerase chain reactionThe “Reaction” Components;The Reaction;Denature (heat to 95oC);2、目的基因与运载体结合;3、将目的基因导入受体细胞并扩增;（三）基因工程操作的主要工具;1、基因的“剪刀”--限制性内切酶;限制性内切酶作用过程;（1） 两个双链DNA片段连接起来 5ˊ- ACG AATTCGT-3ˊ T4DNA连接酶 5ˊ-ACGAATTCGT-3ˊ 3ˊ- TGCTTAA GCA-5ˊ 3ˊ-TGCTTAAGCA-5ˊ;DNA连接酶的作用过程;其它一些重要的工具酶;(1)作用：将外源基因送入受体细胞。 (2)条件： 能在宿主细胞内复制并稳定地保存； 具有多个限制酶切点； 具有某些标记基因。 (3)种类：质粒、噬菌体和动植物病毒。;质 粒;;1、基因工程药物