种子纯度鉴定.ppt

第三章 作物品种纯度鉴定 主要内容 一、研究意义 二、鉴定依据 三、鉴定方法 一、研究意义 1、品种纯度是种子的主要质量指标，影响作物的产量和产品品质。 2、由于纯度低而导致的减产就完全有可能抵消一个新品种的增产潜力，因而纯度低而造成很大的损失。 二、鉴定依据 遗传特性的差异，即调控性状发生发育的基因的差异。 三、主要鉴定方法 1、常规鉴定法 2、生化鉴定法 3、分子标记技术 1、常规鉴定法 1）田间种植鉴定 2）籽粒和幼苗形态鉴定 3）物理化学鉴定法 1、常规鉴定法 1）田间种植鉴定 依据：形态特征和生物学特性 优点：鉴定结果是比较准确、可靠的 缺点：时间长、费用高，用地较多。 1、常规鉴定法 2）籽粒和幼苗形态鉴定 种子粒形、类型、颜色，大小、果柄颜色等 幼苗叶鞘颜色、叶片颜色、叶片形状等特征 1、常规鉴定法 3）物理化学鉴定法 特殊物质或对化学试剂有特殊的生化反应。 2、生化鉴定法 1）同工酶电泳 2）蛋白质电泳法 3）高效液相色谱法 3、分子标记技术 (1)分子标记的特点 (2)常用的分子标记 RAPD中多态性产生的基础 片段数量、大小和有无 ①核苷酸置换造成引物与结合位点无法匹配 ②某个引物结合位点缺失 ③两引物结合位点间的间距过大，因片段太长致使扩增中断（3kb) ④插入或缺失改变了扩增产物的大小 AFLP 的优点 AFLP 结合了RFLP 和RAPD 的优点，稳定可靠，重复性好，灵敏度高，快速高效 不需要分子杂交，不需要预先知道DNA 的序列信息 部分为共显性标记，显示的多态性信息量也很高。 标记非常丰富，在多态性低、待测样品也较少的情况下用AFLP 能达满意的结果 AFLP 标记的缺点 对DNA 纯度和内切酶的质量要求较高 需标记引物或采用银染技术，昂贵费时，操作难度大 RAPD标记的优、缺点 无需知道有关模板DNA的结构信息； 引物没有种属特异性 模板DNA用量少，纯度要求不高 操作简便快速，可实现自动化操作 RAPD标记是显性标记，不能区分纯合型和杂合型 扩增产物易受反应条件影响，实验结果重复性较差。 3）扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP) /variants/aflp.htm Zabean等于1992年发明的一项专利技术 原理：基因组DNA经2个限制性内切酶酶切后，与特定接头相连接，根据接头的核苷酸序列和酶切位点设计引物，进行特异性PCR扩增，经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离检测扩增片段的多态性。由于不同材料的DNA片段存在差异，因而便产生了扩增产物的多态性。实际上它是RFLP与PCR结合的一种中间产物。 AFLP 技术流程 a）酶切和接头连接 双链接头由核心序列和酶切特异性序列组成，通过互补的碱基与酶切序列连接（阻止第2次酶切的发生） b）预扩增 所用引物由对酶切序列特异性的核心序列和3’ 端选择性单碱基组成，接头序列和酶切位点作为预扩增的结合位点 c）选择性扩增 选择扩增的引物是在预扩增引物的基础上增加2个碱基（16种组合），用同位素或其它方法标记 d）扩增产物的检测 * * * * 标记性状 标记基因（括号内数字表示所在连锁群） 色素 ? 花色 W1，w1（8） 茸毛色 T，t（1） 荚色 L1，l1（5）；L2，l2 种皮 G，g（3） 种脐 R，r-m（2）；I，i-i，I-k，i（7） 双色 K1；K2；K3 子叶色 D1（3）；D2；Cyt-G，Y3 叶 ? 小叶数目 L-f1，l-f2 叶形 ln（4）；Lo，lo；l-w1，l-w2；l-b1,l-b2； 落叶性 A 叶绿素缺失 V1；y3；y4；… y20 茸毛类型 Pa1，pa1；Pa2，pa2；P1，p1（2）；P2，p2（4）；Pb，pb（14）；Pc，pc；Pd1，pd2；Ps，ps 茎 ? 扁化茎 f(11) 节间长度 S，s 短叶柄 Lps，lps 矮杆 df2（6）；df3；df4；df5（1） 大豆部分形态标记性状及标记基因 对形态鉴定的评价 优点： 简单 直观 缺点： 数量少、多态性差 易受环境条件因素影响 显隐关系要通过自交或杂交来检出 生化标记：建立在生化遗传学基础上的特异性同功酶或蛋白质。其编码基因的位置及其与其它基因位点的连锁关系也是明确的。 蛋白质是由基因编码的，特定的基因型决定了蛋白质的特定组成，因此蛋白质组成能够反映出其特征或特性 主要利用种子蛋白：数量丰富、稳定、易于提取 生化标记概念 （1）分子标记的特点 ①直接对DNA进行标记，在植物体的各种组织、器官，不同发育时期均可检测到，不受环境、季节的限制，不存在