OSU03012联合Wortmannin对舌鳞癌细胞Tca8113增殖活性与SHIP2蛋白表达的影响.pdfVIP

摘要 摘 要 背景： 口腔鳞癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一，具有增殖速度快、局部侵袭力强 的特点。因此研究口腔鳞癌的增殖、转移及早期预测指标对提高患者的治愈 率和生存率具有重要的意义。舌鳞癌是口腔鳞癌中最常见的一种类型；舌鳞癌除 了具有头颈部恶性肿瘤的特征外，还具有易向颈部淋巴结转移的特点，舌鳞癌 的这些生物学特性，是舌癌术后复发的重要因素，严重影响患者的预后，也给 口腔颌面部肿瘤的治疗及预防造成很大困难。 细胞通过各种转导通路所形成的复杂的网络来传递各种增殖及凋亡信号。 其中，P13K／Akt是一个被证实的经典的信号传导通路，在这个信号通路中，磷脂 3 酰肌醇3激酶(phosphatidylinosito．1 信号通路中关键的蛋白分子，AKT的激活通过影响下游多种效应分子的活化状 态，在细胞内发挥着抑制凋亡、促进增殖的关键作用，它与人类多种肿瘤的发生 发展密切相关。P13K／Akt信号通路在多种人类肿瘤细胞中表达失调，调节着 肿瘤细胞的增殖和凋亡，并且与肿瘤的血管形成和侵袭转移也密切相关，因此 影响患者的预后，同时也为肿瘤的治疗提供了新的靶点，是目前肿瘤研究的焦 点之一。3．磷酸肌醇依赖的激酶．I(PDKl)是Akt的上游关键的活化激酶，它直接 影响着AKT的活化程度，从而影响AKT对下游蛋白的调控，包括基因表达调 控、细胞周期调控、细胞增殖及分化等。因此，随着其蛋白分子结构及作用机 制不断被证实，PDKI在P13K／Akt信号转导通路中的重要性以及对肿瘤的影响 越来越受到关注， 以信号通路为靶点的治疗在抗肿瘤方面有广阔的应用前景。 目的： 为了研究P13K／PDKl／Akt信号通路对舌鳞状细胞癌的增殖及相关蛋白表达 的抑制剂OSU03012，以体外培养舌鳞癌细胞株Tca8113为研究对象，来分别阻 断以及联合阻断P13K／PDKl／Akt信号通路，来观察对Tca8113细胞增殖抑制的 摘要 影响，同时检测SHIP2蛋白表达的情况，为舌癌的靶向治疗提供部分理论基础。 材料与方法： 1．细胞株： 人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113由上海交通大学医学院附属第九人民医院 口腔颌面外科实验室惠赠 2．主要材料： 公司。 3．方法： C02的饱和湿度孵箱中培养舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株，每2天换液一次，待细胞 生长培养瓶底部约70．80％时，0．25％的胰蛋白酶消化，传代。 细胞Tca8113增殖活性的影响。 (3)应用I汀．PCR，检测一定浓度的OSU．03012对舌鳞癌Tca8113细胞SHIP2蛋 白mRNA表达量的影响。 blot法检测一定浓度的OSU．03012对Tca8113细 (4)免疫细胞化学法、western 胞内SHIP2蛋白的表达水平变化。 结果： 在MTT检澳IJosu03012对Tca8113细胞增殖的影响中，在同一时间，随着药 物浓度的增加，增殖抑制率逐渐增加。24d,时、48d时、72d时时间点各浓度 组之间细胞增殖抑制率均存在差异。在同一浓度，实验组随着时间的增加，抑 制率逐渐增强。因此，Tca8113细胞随着OSU03012药物浓度增加及作用时间的 延长生长受到明显抑制。 在MTT检测Wortmannin对Tea8113细胞增殖的影响中，当Wortmannin浓 度低于500nmol／L时，对Tca81 nmol 13细胞的增殖抑制不明显；在浓度为500 Ⅱ 摘要 和1“mol时，能够对Tea8113细胞产生增殖抑制作用，但随着时问的延长，其 增殖抑制无增强的趋势。 13细胞 13 增殖的