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虎杖苷抗肿瘤作用及机制研究 中文摘要 中文摘要 恶性肿瘤是严重威胁人类健康和生命的疾病，由于人口增长、老龄化和不良 生活习惯的影响，近年来在全世界范围内恶性肿瘤的发病率持续上升。恶性肿瘤 已成为发达国家和发展中国家的首位死因。乳腺癌是世界各地女性最常见的恶性 肿瘤之一，占女性新发恶性肿瘤的 23% ，具有发病率高、侵袭性强、病程进展缓 慢等特点。肺癌则是男性中最常见的恶性肿瘤，是男性癌性死亡的首位原因，女 性癌性死亡的第二大肿瘤。 目前对于恶性肿瘤的主要治疗方法包括：手术，放射治疗，化疗和分子靶向 治疗 。化疗在恶性肿瘤治疗中仍处于基础地位，但目前临床上广泛使用的化疗药 物疗效有限，毒性作用较大，经几次应用后还会发生耐药。近年来，采用传统中 药等植物提取物探讨恶性肿瘤治疗的新途径引起了人们的关注，从传统中药提取 的抗肿瘤药物如冬凌草甲素、黄连素、姜黄素的体外实验表明可抑制多种肿瘤细 胞的增殖，从植物中提取的紫杉醇、喜树碱、长春新碱等药物已在临床上广泛应 用。因此筛选新型抗肿瘤的植物药，确定其抗肿瘤作用并探讨其机制，已成为当 今肿瘤治疗研究领域的热点之一。 虎杖苷是从虎杖的干燥根茎中提取的第 4 种单体，又名白藜芦醇苷，现代药 理学研究表明虎杖苷对心肌细胞、血管平滑肌细胞、抗血小板聚集、改善微循环 等有显著作用，此外还能减轻多种因素造成的组织器官损伤，具有保护肝细胞， 降血脂及抗脂质过氧化等作用。而对其抗肿瘤作用的研究报道仍较少，本课题是 研究虎杖苷在乳腺癌细胞、肺癌中的生物学功能以及相关机制，旨为进一步开展 虎杖苷抗肿瘤作用的基础和临床研究提供实验基础和理论依据。本课题实验内容 主要分为五部分： 第一部分 虎杖苷对恶性肿瘤增殖抑制效应的研究 目的： 研究虎杖苷在体内外对乳腺癌、肺癌生长的影响，并观察其对正常细胞的毒 I 中文摘要 虎杖苷抗肿瘤作用及机制研究 性和在体内的对实验动物的毒副作用。 方法： 应用MTT 或CCK8 法检测虎杖苷对 10 种不同来源的恶性肿瘤细胞及两种正 常上皮细胞生存曲线的影响并比较了虎杖苷和白藜芦醇抑制肿瘤细胞生长的效 力。应用流式细胞术分析虎杖苷对乳腺癌及肺癌细胞的细胞周期变化的影响及凋 亡诱导情况。采用人肺癌细胞皮下移植动物模型观察虎杖苷对动物体内肿瘤生长 的影响及其毒副作用。 结果： 虎杖苷对10 种不同来源的恶性肿瘤细胞包括乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231 ， 肺癌 A549 、NCI-H1975 、宫颈癌Hela 、卵巢癌 SKOV-3、肝癌 SM7721、鼻咽癌 CNE-1，白血病HL-60 及K562 细胞均具有明显的抑制其生长的作用，且生长抑制 作用呈剂量和时间-效应关系。虎杖苷对正常乳腺上皮细胞 MCF- 10A 及肺支气管 上皮细胞HBE 的毒性作用小于相应的肿瘤细胞。虎杖苷对乳腺癌及肺癌细胞的生 长抑制作用明显强于其糖配基白藜芦醇。流式细胞术的结果显示虎杖苷可引起肿 瘤细胞阻滞于细胞周期进程的 S 期，虎杖苷诱导肿瘤细胞发生凋亡。动物实验结 果显示虎杖苷可明显抑制裸鼠移植瘤的生长且未见明显毒副反应。 第二部分 虎杖苷抗肿瘤作用的分子机制研究 目的： 研究虎杖苷抑制肿瘤细胞生长、引起细胞周期阻滞及诱导肿瘤细胞凋亡的分 子机制。 方法： 采用人磷酸化激酶蛋白芯片及凋亡相关蛋白芯片检测经虎杖苷处理的乳腺癌 细胞内磷酸化激酶及凋亡相关蛋白的变化。应用Western blot 实验验证和检测与细 胞生长、细胞周期进程和细胞凋亡相关蛋白的变化。应用MTT 法及流式细胞术检 测PI3K、Erk 、JNK、P38 抑制剂对虎杖苷抗肿瘤作用的影响。 II 虎杖苷抗肿瘤作用及机制研究 中文摘要 结果： 虎杖苷处理后的乳腺癌细胞内 CREB 的活性受到抑制，且抑制作用