课题3 分解纤维素微生物的分离.ppt

酶 筛选 操作 结果 延伸 酶 筛选 操作 结果 延伸 课题3 2.纤维素酶： 葡萄糖苷酶 纤维素 C1酶 Cx酶 纤维二糖 葡萄糖 复合酶，包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶。 基础知识 1、纤维素：一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，广泛地存在于植物的根、茎、叶等器官中。地球上含量最丰富的多糖。 甲 乙 思考：乙试管的滤纸条为什么会消失？甲试管的作用是什么？ 试管 甲 乙 滤纸条 1cm*6cm 1cm*6cm 醋酸—醋酸钠缓冲液（0.1mol/L，pH4.8） 11ml 10ml 纤维素酶 1ml 条件 两试管固定，在摇床上振荡 结果 时间够长，滤纸被完全分解 基本无变化 纤维素酶 实验：纤维素酶分解纤维素的实验 刚果红染色法 刚果红能与纤维素形成红色复合物，而不与水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。 3、纤维素分解菌的筛选 用加入刚果红的纤维素培养基(鉴别培养基)去培养微生物时，如果培养基中出现以菌落为中心的透明圈时，可说明该菌落是纤维素分解菌，因为它已将被刚 果红染成红色的纤维素分解了。 练一练： 1、下列关于纤维素酶的说法，错误的是 A、纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种 B、纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖 C、纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁 D、葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖 2、利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是 A、刚果红能与纤维素形成红色复合物 B、刚果红能与纤维二糖形成红色复合物 C、刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物 D、若培养基上产生了透明圈，则说明已筛选出了纤维素分解菌 实验设计 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选产生透明圈的菌落 思考：本实验的流程与课题2中的实验流程有哪些异同？ 课题2：在以尿素为唯一氮源的选择性培养基上，直接接种培养分离得到菌落。 本课题：通过选择培养，使纤维素分解菌得到增殖后，再将菌液涂布在鉴别培养基上。 其他步骤基本一致。 土壤取样 1、取样的环境是怎样的，理由是什么？ 选择纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等等。 生物与环境的互相依存关系，在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对较高，因此从这种土壤中获得目的微生物的几率要高于普通环境 2、将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸 应该埋进土壤多深？ 能使纤维素分解菌相对聚集。一般应将纸埋于深约10cm左右腐殖土壤中。 选择培养 1、选择培养的目的： 增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物 2、制备选择培养基 参照课本29页旁栏中的比例配置，回答下列问题 a、该配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？ b、这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？ c、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用 是液体培养基，原因是配方中无凝固剂 有选择作用，本配方中的碳源是纤维素，所以能分解纤维素的微生物才可以大量繁殖 用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照 防止菌沉、增加溶氧量、使微生物与培养基混合均匀 3、选择培养的操作方法： 将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下震荡培养1～2天，直至培养液变浑浊。吸取适量的培养液,稀释涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上。也可重复选择培养. 思考：为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？ 在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用 梯度稀释 1、按照课题1的稀释操作方法，将选择培 养后的培养基进行等比稀释，稀释最大倍数 到106 2、目的：a、分散细胞；b、保证能选出菌落数在30－300的平板 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 1、制备培养基:参照P29旁栏中的比例 2、涂布平板：将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1ml涂布在鉴别培养基上，30℃倒置培养。 挑选产生透明圈的菌落 参照课本刚果红染色法，挑选产生透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落 刚果红染色法 方法一：先培养微生物，再加入刚果 红进行颜色反应 方法二：在倒平板时就加入刚果红 思考：这两种方法各有哪些优点与不足？ 方法一：缺点是操作烦琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 方法二：优点是操作简便，不存在菌落混杂问题。 缺点一是由于培养基中还含有淀粉类物质