切片实验理论教程解读.ppt

超薄切片技术主要包括取材、固定、包埋、切片、染色等步骤。 透射电镜标本制备： 1、固定 （戊二醛与锇酸等） 2、包埋（树脂） 3、切片（50-80nm) 4、染色（醋酸铀和柠檬酸铅等重金属）标本在荧光屏上呈黑白反差的结构影像。 电子密度高、电子密度低：被重金属浸染呈黑色的结构，称电子密度高；反之，浅染的部分称电子密度 内质网透射电镜图 ? 超薄切片技术 用于电镜观察的样本制备，观察组织、细胞内部超微结构。分辨率0.2nm。 ?负染色技术（Negative staining） 染色背景，衬托出样品的精细结构 ?冰冻蚀刻技术（Freeze etching） 冰冻断裂与蚀刻复型：主要用来观察膜断裂面的蛋白质颗粒 和膜表面结构。 ?电镜三维重构技术 电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结合而形成的具有重要应用前景的一门新技术。 电镜三维重构技术与X-射线晶体衍射技术及核磁共振分析技术相结合，是当前结构生物学（Structural Biology）（主要研究生物大分子空间结构及其相互关系）的主要实验手段。  主要电镜制样技术 2.扫描电子显微镜技术（scanning electron microscope） 扫描电子显微镜技术要观察的组织不需制成切片。 固定后的标本