实验三间接ELISA要点解析.pptVIP

免疫酶标记技术是继免疫荧光抗体技术和放射免疫分析之后发展起来的一大新型的血清学技术。目前，免疫酶标记技术已成为免疫诊断、检测和分子生物学研究中应用最广泛的免疫学方法之一。 酶联免疫吸附试验 (enzyme-linked immunosorbent assay , ELISA) 一、基本原理 它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。 在这种测定方法中有3种必要的试剂： ①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） ②酶标记的抗原或抗体（标记物） ③酶作用的底物（显色剂） 酶标抗体技术的基本程序 1、将酶分子与抗原或抗体分子共价结合 2、将酶标抗体(抗抗体)与吸附于固相载体上的抗原(抗体)发生特异性结合，并洗下未结合的物质 3、滴加底物溶液后，底物在酶作用下水解呈色；或者底物不呈色，但在底物水解过程中由另外的供氢体提供氢离子，使供氢体由无色的还原型变为有色的氧化型，呈现颜色反应。因而，可根据底物溶液的颜色反应来判定有无相应的抗原抗体反应。 间接ELISA 间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体。 底物显色反应 抗原包被 一抗反应 二抗反应 基本流程 结果测定 一、抗原包被 固相载体 聚苯乙