第五章转转录后加工.ppt

第五章 转录、转录后加工 昆明医学院药学院药理学系 周轶平 2011.4 Polymerase Chain Reaction (PCR) 内容 转录产物RNA的碱基序列，除了T变U 外，其余与编码链相同。 内容 2.2.2. DNA双链解开: RNA聚合酶挤入DNA双链中，解链长度约12~17个核苷酸的解链长度。形成开链式启动子复合物。 (二元开放复合物：全酶/ DNA ) 内容 3.2. RNA聚合酶II的启动子 顺式作用元件（cis-acting element） 真核生物结构基因上游的调控区存 在的相似或一致性的DNA序列。 3.2.1. TATA box： 也称基本启动子 在-30~-25区域有一个七核苷酸保守序列TATA(A/T)A(A/T) TATA框与RNA聚合酶II结合后才能转录开始。 相当于原核生物的-10序列。 3.2.2. CAAT框 位于-75附近，有一个保守序列GG(C/T)CAATCT CAAT框控制转录起始的频率 CAAT框保守序列的正反取向都能发挥作用 3.2.3. 增强子 是指能使和它连锁的基因转录明显增加的DNA序列，一般在-100以上。 性质： (1) 增强效应非常明显 (2) 增强效应与其位置和取向无关 (3) 大多为重复序列：适合与某些蛋白结合，核心序列是TGTGG(AAA/TTT)G (4) 其增强效应有严密的组织性和细胞特异性：只有特定的蛋白质参与才能发挥功能 (5) 没有基因专一性：与不同的基因组合均表现增强效应 (6) 许多增强子还受外部信号的调控： 3.3. 原核生物和真核生物转录启动子的结构异同 1、原核生物启动子类型少，而真核生物的多； 2、原核生物启动区范围小 3、原核生物启动子结构简单 4、原核生物启动子结构组成与真核生物RNA聚合酶II的启动子更接近 5、原核生物和真核生物RNA聚合酶II的转录起始位点第一个碱基均为嘌呤碱 内容 定义：能阻断、抑制或干扰RNA的代谢过程，最终抑制转录的一类化合物，称RNA生物合成抑制剂或转录的抑制剂。 分类： 按照抑制剂作用性质的不同可分为三类 内容 转录后加工（transcriptional processing) 由RNA聚合酶合成的原初转录物，经过剪切、剪接、特殊结构的形成、碱基修饰和糖苷键的改变等过程，才能转变为成熟的RNA分子，也称为RNA的成熟。 核酶的发现是对传统酶学的挑战； 揭示了内含子自我剪接的奥秘，促进了RNA的研究； 为生命的起源和分子进化提供了新的依据； 利用核酶的结构设计合成人工核酶 。 2、校正作用 3、调控翻译 通过编辑可以引入或去除起始密码子或终止密码子 3.5. 转录延长 真核生物转录延长过程与原核生物大致相似，但因有核膜相隔，没有转录与翻译同步的现象。 RNA-pol前移, 核小体移位和解聚现象。 RNA-Pol RNA-Pol RNA-Pol 核小体 转录延长中的核小体移位 转录方向 3.6. 转录终止 和转录后修饰密切相关，目前机制尚不清楚。 Roger Kornberg 2006年诺贝尔化学奖——真核转录机制 转录与复制的异同 相同点 DNA为模板 三磷酸核苷或脱氧核苷为原料 合成方向（5’→3’）及连接的键（磷酸二酯键）相同 反应体系需Mg2+参与 服从碱基配对原则 需要依赖于DNA的聚合酶 A-U、T-A、G-C A-T、G-C 配对 ３种RNA 子代dsDNA 产物 RNA聚合酶 DNA聚合酶 酶 无 一段RNA 引物 NTP(N=A、G、C、U) dNTP (N=A、G、C、T) 原料 DNA的一条链（模板链） DNA双链 模板 转 录 复 制 转录和复制的区别 剪接等修饰 无 产物加工 转 录 复 制 转录和复制的区别 转录的基本原理 1 原核生物的转录过程 2 真核生物的转录过程 3 转录的抑制剂 4 转录后的加工 5 与RNA聚合酶结合而影响其活力抑制RNA的合成 有些抗生素或化学药物 通过与DNA结合而改变模板的功能 烷化剂类的氮芥、磺酸酯、氮丙啶等及其衍生物 嘌呤和嘧啶类似物 形成核苷酸类似物而抑制RNA的合成 巯基嘌呤类、二氨基嘌呤类、氮尿嘧啶 分类 利福霉素 利迪链菌素 α-鹅膏蕈碱 不作用于DNA 特异地抑制细菌RNA聚合酶的活性，抑制细菌RNA的合成 与细菌的RNA聚合酶β亚基结合 抑制转录过程中RNA链的延长反应 抑制真核生物RNA聚合酶 对细菌RNA聚合酶的抑制作用极为微弱 思考题 1.名词解释：转录、启动子 2.试比较转录与复制的异同 3. 原核生物和真核生物RNA聚合酶的不同 4.什么是RNA生