5-基转录及加工.ppt

基因表达包括转录（transcription）和翻译（translation）两个阶段。 转录是指拷贝出一条与DNA链序列完全相同(除了T→U之外）的RNA单链的过程，是基因表达的核心步骤。 翻译是指以新生的mRNA为模板，把核苷酸三联遗传密码子翻译成氨基酸序列、合成多肽链的过程，是基因表达的最终目的。 1.基因转录是基因表达的第一步，也是基因表达调控中最重要的环节； 2.转录中存在链的选择、起点和终点的选择。只有部分作为模板，部分遗传信息的传递. 3.基因的转录有时间和空间的差异； 4. 产物mRNA、t RNA 、rRNA和小分子RNA 5.转录的准确性低于复制。 基因转录只利用DNA双链中的一条链作为模板，合成出mRNA，序列与另一条链相同。 为编码链，有意义链。模板链为无意义链；  转录的基本过程 1、模板识别(Template Recognition) 2、转录起始(Initiation) 3、转录的延伸(Elongation) 4、转录的终止(Termination) RNA聚合酶-模板识别 E.coli中由一种RNA聚合酶催化所有RNA的合成（mRNA、t RNA 、rRNA和其它小分子RNA ） E.coli的RNA聚合酶全酶由核心酶(?2、?、?’、 ?亚基)和??亚基组成； ?亚基——与核心酶的组装有关，参与RNA聚合酶和调控序列的结合，与部分调节因子的相互作用； ?亚基—催化磷酸二酯键的合成； 与模板DNA、新生RNA链及核苷酸底物相结合 与?’亚基组成了聚合酶的催化中心。 The βand β’subunit of RNA polymerase have a channel for the DNA template. 利福平（1965）rifampicin和利福酶素rifamycin，能结合在?亚基上抑制RNA链的合成或延长。结核病治疗 ?亚基——不能独立存在，本身无催化活性；在决定RNA聚合酶起始转录中起关键作用 与核心酶结合，引起a2bb’构象变化，改变核心酶与DNA结合的亲合性和特异性。 增加聚合酶对启动子的亲和力(提高103倍)，降低它对非专一位点的亲和力(降低104倍) 。 是启动子特异性识别的关键酶， E.coli中有多种不同?亚基，适应不同发育阶段要求； ?亚基一旦起始识别后， ? 因子脱落，核心酶才能延伸 middleman 　　此外，RNA聚合酶还有解旋酶和重新螺旋化及校正的功能。 ——全功能酶（识别、解旋、螺旋、聚合延伸、校正等功能） 启动子promoter 启动子：RNA聚合酶全酶以很高的亲合性结合在基因调控区的特定位点。Upstream 　　原核生物启动子序列-10区和-35区 　　　　　　　　　——必需序列 -10区：又称pribnow框1975 ， 在-6~-13bp之间， 共同的保守序列为 TATAAT， 酶在-10区与 DNA结合成稳定的复合物，在转录方向上解开双链形成开放型起始结构。 纯化，RNA聚合酶不能重新结合或不能选择正确的起始点？ -35区(Sextama盒) 噬菌体的左、右启动子PL及PR和SV40启动子发现 -35区：共同序列为TTGACA，是RNA聚合酶起始识别区，这一识别过程与?因子有关。 　　-10区和-35区相距16～19bp，大致是双螺旋绕两周的长度，两个结合区在分子的同一侧面，能感觉到沟底碱基的特异形态。 过大或过小都会降低转录活性。 这可能是因为RNA Pol本身的大小和空间结构有关 原核生物启动子的共同的特点 （1）结构典型，都含有识别（R），结合（B）和起始（I）三个位点； （2）序列保守，如-35序列，-10序列； （3）位置和距离都比较恒定； （4）直接和多聚酶相结合； （5）都在其控制基因的5′端；上游 （6）决定转录的启动和方向。 （7）常和操纵子相邻； 转录过程的起始： 延伸： 起始结束后， ?因子脱落，由核心酶沿模板链移动，完成延伸过程。 核心酶在DNA链上覆盖大约80bp，其中解链部分只有~18bp，RNA-DNA杂交链长度约12bp，当酶分子离开这一区域向前移动，DNA又形成双链，RNA游离出来。 终止： 终止序列—DNA上转录到一定位置后，转录停止，又叫终止子。 1.不需要ρ 因子的转录终止——强终止 特点：DNA序列有双重对称，形成末端发夹结构，模板DNA上有一串A， RNA3’端有UUUU