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中药分离中制备薄层的应用概述 摘要：制备薄层（PTLC）具有简便、快捷和使用成本低的特点，一直以来都是中药分离不可缺少的一部分。在翻阅大量相关文献的基础上，本文就制备薄层的原理、分类及传统制备薄层使用中的关键问题等进行概述，为制备薄层的使用及其应用的进一步改进提供方便。 关键词：制备薄层 分离 薄层色谱 PTLC 1、原理 制备薄层色谱是使用薄层色谱板进行制备分离，从混合物中提取所需要的单体【1】。与常用的柱色谱相比，具有简单、快速与节省溶剂与人力的优点，是实验室比较常用的制备分离方法之一【2】。该方法在中药研究中尤其是化学成分分离方面应用广泛且效果突出，以下针对制备薄层色谱的原理分类、特点及在中药研究中的应用等方面进行具体介绍。 制备薄层色谱的基本原理与一般薄层色谱相似【3】，是利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在移动相（溶剂）流过固定相（吸附剂）的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的【4】。一般要通过分析型TLC预实验来确定PTLC应用的可行性【5】，在分析型TLC板上要有较好的分离效果（如图1），在PTLC中才可能将化合物分开。 图1 TLC样板 2、分类 制备型薄层色谱方法依据流动相展开方式的不同又分几个不同类别。其中以流动相靠毛细管作用力流经固定相为传统的制备型薄层色谱【6】；还有流动相则靠外力强制流动，又分制备离心薄层色谱和制备加压薄层色谱。 2.1 传统制备薄层色谱 传统制备薄层色谱一般配合柱色谱用于中药化学成分的分离，是最简单的制备型色谱分离方法之一。该法常用于分离纯化毫克级的样品【7】。展开剂可以通过毛细作用展开, 也可以通过压力展开【8】(或强迫流动展开)。相对于分析型的薄层色谱, 制备薄层色谱由于板尺寸大, 吸附剂的颗粒大【9】,而且样品过载, 所以同等条件下制备薄层色谱的分离效果比分析型的薄层色谱的分离效果要差【10-11】。制备薄层色谱与分析型薄层色谱的操作程序基本一样。目前制备薄层色谱法有微量吸管法、融污斑点法、接触加样法、热微量转移技术及滤纸移样法等上样方式。该方法适用于制备量较小、分离程度较好的场合。 2.2 加压薄层色谱 加压薄层色谱的装置是由一弹性的气垫覆盖在水平的薄层色谱板上，外力使薄层色谱在分离过程中没有气相存在，展开剂被强制流动【12】，使样品展开速度加快。加压薄层色谱依靠加压泵将展开剂直接泵入薄层板中，并通过泵来调节展开剂的流速。它是一种将薄层色谱法和高效液相色谱法的优点结合起来的技术，加压展开过程在密闭体系内完成，完全排除了移动相蒸汽对板层的影响。展开方式与常规薄层色谱法类似，且更接近于高效液相色谱法【12】。并能在长距离上实现高效分离，粒度越小分离效率越高。凡能用一般薄层色谱法分离的物质均可用加压薄层色谱法分离，有些一般用薄层色谱法很难分离的混合物，用加压展开技术却很容易分开。它结合了薄层色谱法和高效液相色谱两者的长处。目前也越来越多地用于中药难分离物质中。值得注意的是该方法也适合于分离小量（50-100mg）但已经部分纯化了的样品。 2.3 离心薄层色谱 离心薄层色谱技术主要是在传统的制备薄层色谱基础上运用离心力，促进流动相加速流经固定相。洗脱过程就是不同组分成同心圆分布的过程，在离心力的作用下，当色谱带洗脱到色谱板边缘后，色带快速旋转脱离色谱板，并经色谱室内的流出管收集，同时利用薄层色谱对所收集的馏分进行分析，从而使不同成分分离。但往往利用离心薄层色谱分离需要特殊的分离色谱仪器且该法适用于制备量稍大，分离程度较差的场合。 3、传统制备薄层应用中的关键 3.1 吸附剂 硅胶是最常用的吸附剂，可用它来分离亲脂或亲水性物质。一些商品吸附剂可用来制备致密薄层，其粒度及孔径大小与相应TLC级吸附剂的相似【13】。现实验室自制吸附剂方式为：在水中加0.5%的CMC-Na，煮沸至均匀，静置，加适量硅胶拌匀即可。 3.2 上样 上样是PTLC分离最为关键的步骤之一。薄层板最好先用溶剂展开一次，以减少所需化合物从吸附剂洗脱下来时可能混入的杂质。上样前先将固体样品溶于少量溶剂，低挥发性溶剂可引起点样带变宽，因此最好选用挥发性溶剂。点样带应尽可能狭窄，以获得更好的分离效果。点样可手工进行，也可用点样器。 如果点样带太宽，可先用高极性的溶剂将薄层板展开至点样带上端约2cm处【13-15】，以起到浓缩的作用，然后干燥，再用所需溶剂展开。另外，底部薄，往上逐渐变厚的薄层板具有更好的分辨率。 3.3 流动相的选择及PTLC板的展开 PTLC板的分离效果受许多因素影响。一般来讲，一块1cm厚的20cm×20cm硅胶板可分离10-100mg的样品【16】。一定范围内，如果吸附剂厚度加倍，可多上样50%左右。 PTLC所用的洗脱剂条件由分析型TLC预实验来