水果中诺如病毒检测方法的的优化要点解析.doc

水果中诺如病毒检测方法的优化Hee-Yeon Kima, In-Shin Kwakc, In-Gyun Hwangc, GwangPyo Koa,b 摘要：食品中诺如病毒(NoV)的检测对于食源性诺如病毒引起的爆发性疾病的研究和预防至关重要。然而，目前诺如病毒的检测方法还未有得到很好的检验或优化。本研究中，对不同水果中NoV的洗脱、PEG富集病毒以及使用RT-PCR提取病毒RNA的各种有效的方法皆进行了优化。首先，对6种不同的缓冲液进行水果表面NoV病毒的洗脱的方法评估。即将已知量的诺如病毒喷洒于葡萄、草莓、树莓表面，采用蒸馏水、0.05M甘氨酸-0.14M NaCl(pH 7.5)、2.9%胰蛋白磷酸肉汤-6%甘氨酸、100 mM Tris HCl(pH 9.5)、50mM甘氨酸-50mM MgCl2(pH 9.5)和3%的牛肉浸出物等6种缓冲液进行洗脱，RT-PCR检测结果表明：3%的牛肉浸出物对病毒的洗脱效果最佳。其次，对检测诺如病毒最常用的沉淀剂-PEG分别进行了不同分子量、作用时间和温度等三个因素的进行了评估，结果表明：PEG 10000，4h，室温条件为最佳。最后，对5种不同的RNA提取方法进行评估，表明：QIAamp Viral RNA Mini kit提取效果最佳。采用优化后的方法对不同水果总诺如病毒的检测显示，将近6-80%的NoV病毒粒子可以检出。引言 食物传