第一章植物病原检验-修改2.ppt

种子检疫技术 王丽丽（病） 高有华（虫） 2013-2-25 绪 论 植物检疫的基本概念 一个国家或地方政府，以法规形式 确定植物、种子、苗木及植物产品可能人为传播、携带危险性病、虫、杂草，以先进的科技手段严格检查检验，并对发现的种类，及时做出切合实际的处理和监督执行，防止其扩大蔓延。对无检疫对象的货物，应发放通行证。对发生疫情纠纷需依法仲裁者，应提供可靠的法律依据。 植物检疫的重要意义 · 检疫主要是为了保护本国农、林、牧业 的安全生产，免受外来有害生物 的危害，促进农产品贸易 的正常往来。 · 检疫是国民经济 中不可缺少的一部分。 绪 论 植物检疫的主要法规与政策 植物检疫历来受到各国政府和国际贸易组织的重视。 吸水纸法 吸水纸法 保湿萌芽检验法除可用于了解种子的带菌率外，还可用于种子的发芽率和发芽势测定。 要想检验种子内部带菌时，需将种子表面消毒，以杀死豁附种子表面的真菌孢子和细菌，然后进行萌芽试验。 这种检验方法，简单易做，并不需要较好的设备，操作也方便，所以应用很广。 第二节 植物病原细菌的检验 当病害被初步确认由细菌引起时，为确定病原细菌的种类，需作进一步的鉴别性诊断。一般情况下，先把病原细菌提取富集、分离纯化、明确致病性，最后进行种类鉴定。 二、进一步诊断： 第二节 植物病原细菌的检验 （三）细菌分离培养法（提取、分离） 1.细菌的提取 1)种带细菌的提取 A 浸种法：用灭菌水、灭菌生理盐水等溶液浸泡、振荡洗涤种子，是细菌释放出来，制得细菌提取液。 B 干磨法：种子研磨成粉，加入灭菌水振荡，静置，细菌富集于上清液。 C 湿磨法：种子加无菌水湿磨成糊状物，静置，取上清液。 2)苗木等繁殖材料：一般分离是先选择新鲜病斑或病健组织交界处，切取小块组织，经表面消毒，即用70％酒精或0.5％次氯酸钠（NaOCI）液，并以无菌水洗净，研碎后浸泡片刻。 二、进一步诊断：  2.细菌的分离、纯化 （1）方法：在培养基上用划线或稀释分离法，得到纯化的单个菌落。 （2）常用培养基：①普通营养培养基（牛肉汁葡萄糖培养基）、 ②鉴别性培养基、 ③选择性培养基。 在鉴别性培养基上，目标细菌菌落有明确的鉴别特征。 选择性培养基则促进目标菌生长，而抑制其它微生物生长。 （三）细菌分离培养法 第二节 植物病原细菌的检验 （四）生理生化测定 用细菌培养物接种于特定的培养物或检测管，通过产酸、产 气、颜色变化等反应，检测细菌的耐盐性、好氧或厌氧性、对碳素化合物的利用和分解能力、对氮素化合物的利用和分解能力、对大分子化合物的分解能力等，达到 鉴别目的。 第二节 植物病原细菌的检验 用植物病部的细菌溢或分离纯化的细菌培养物接种寄 主植物，检查典型的症状。 （五）致病性测定 第二节 植物病原细菌的检验 （六）过敏性反应测定 能区分病原菌和腐生菌。烟草是最常用的测定植物。取 待测细菌的新鲜培养，制成细菌悬浮液，用注射器接种。注射针头由烟草叶片背面主脉附近插入表皮下，注入菌悬液。若为致病细菌，１—２天后，注射部位变为褐 色过敏性坏死斑块，叶组织变薄变褐，具黑褐色边缘。 第二节 植物病原细菌的检验 在固体平板上培养时形成许多边缘整齐、透明光亮的圆形无菌空斑，称为“噬菌斑 ”，肉眼即可分辨；噬菌体可使混浊的细菌悬浮液变得澄清。 （七）噬菌体检验 ①增殖法：加人已知的专化噬菌体，经过一定时间的培养，增殖，判断是否存 在相对应的病原细菌。 ②间接法：测定种子是否存在目标噬菌体，从而间接证明是否带菌。(较常用) 优点：简便、快速，能直接用种子提取液测定。 缺点：非目标菌多量存在时敏感性较差，噬菌体的寄生专化性和细菌对噬菌体 的抵抗性都可能影响检验 的准确性。 第二节 植物病原细菌的检验 血清学检验依据抗原与抗体反应 的高度特异性，在具备高效价抗血清情况下，血清学方法不需要复杂的设备，便于推广使用。 最常用的血清学检验方法是玻片沉淀法 和琼脂双扩散法 ，近年趋向于利用荧光抗体法 和酶联免疫吸附法 。 （八）血清学（鉴定） 第二节 植物病原细菌的检验 抗原 ：待测细菌 抗体 ：目标细菌液 （或 提纯的细菌肤聚糖、脂多糖及可溶性蛋白等 ）注射于免疫雄性家兔。 在第Id, 4d, 7d, 10d, 13d, 17d分别注射0.2m