生化分析之免疫分析要点解析.ppt

生化分析 Analytical Biochemistry 定义 Laboratory methods to determine the composition of biological samples. 生命活性物质的分析和利用生物化学技术所进行的分析. 主讲内容 免疫分析(3) 氨基酸分析(1) 蛋白质分析(2) 酶法分析(2) 糖的分析(1) 核酸分析(3) 生物大分子分离纯化技术(2) 参考书目: 生化分析, 李元宗,常文保, 高等教育出社,2003. Analytical Biochemistry, D.J. Holme, H. peck, 世界图书出版公司,1999. 免疫分析 利用抗原抗体之间特异性反应实现对抗体、抗原或相关物质进行检测的分析方法． 历史: Jenner 　Behring, 　北里(1890) Yallow , Berson (1959) 一、基本概念 １、抗原（Antigen, Ag) 能引起动物机体特异性免疫应答，并能和抗体发生特异性结合反应的物质。 免疫原性 (Immunogenicity):引起免疫应答的性质。 抗原性(Antigenicity): 与抗体反应的性质。 半抗原 (Hapten)：不能引起免疫应答，却能和抗体反应的一类小分子。 抗原决定簇(Antigen Determinant):决定或控制抗原特异性的特殊化学基团。 免疫原性的化学基础 ２、抗体 通过免疫应答产生的，能够与抗原发生特异性反应的蛋白质就是抗体。 a: 抗体的结构 b: 免疫球蛋白的种类 c: 免疫球蛋白的抗原决定簇 d: 抗体的制备 e:单克隆抗体 a: 抗体的结构(1) a: 抗体的结构(2) a: 抗体的结构(3) b: 免疫球蛋白的种类 免疫球蛋白的种类(2) c: 免疫球蛋白的抗原决定簇 免疫球蛋白本身是良好的抗原,其分子之间的结构差异表现为抗原性的不同,表现在各免疫球蛋白 分子的抗原决定簇中氨基酸的组成和序列的不同.血清学上据此将免疫球蛋白分子的抗原决定簇分为以下三种类型: 同种同型(Isotype):同一种属所有个体共同具有的免疫球蛋白分子抗原特异性. 同种异型(Allotype):同一物种不同个体间免疫球蛋白具有不同的抗原特异性. 独特型(Idiotype):不同个体的每一抗体产生克隆,针对不同抗原时,产生的不同特异性抗体的高变区之氨基酸种类和排列各异,因此表现出各自独特的抗原特异性. d:抗体的制备(1) (1)、抗原的制备（半抗原与载体蛋白的偶联）： 　 重氮盐偶联法、 碳二亚胺法、 戊二醛法、 混合酸酐法 重氮盐偶联法 碳二亚胺法 戊二醛法 混合酸酐法 d:抗体的制备(2) (2)、影响免疫应答的因素: 遗传因素、 抗原给予方式、 佐剂的影响 d:抗体的制备(3) (3)、抗体产生的细胞理论 d:抗体的制备(4) (4)、抗体产生的动力学 d:单克隆抗体 二、免疫分析方法 1、分析方法基础：抗原抗体反应 2、基于免疫沉淀反应的经典方法 3、标记免疫分析方法 １、分析方法基础：抗原抗体反应 a、结合力：离子键（静电）疏水力 范德华力 氢键 b、价态：可以与一个抗体分子反应的抗原的数目 c、特点：高度特异性　可逆性　 ２、基于免疫沉淀反应的经典方法 凝聚反应　（Agglutination Reaction) 颗粒性抗原（细菌血球等）与相应抗体在适当条件下相 互作用，经过一定时间出现肉眼可见的凝聚现象． 直接凝集反应:颗粒性抗原与相应抗体直接作用. 间接凝集反应:可溶性抗原或抗体与无关载体(颗粒)结合后 再与相应抗体作用出现凝集. 沉淀反应（Precipitation Reaction) 　 可溶性抗原与相应抗体在适当条件下反应，经过一定时间出现可见的沉淀现象． 沉淀反应（Precipitation Reaction) 凝胶沉淀反应(免疫扩散) 单向琼脂扩散实验(Simple Diffusion Test): 定量检测各种免疫球蛋白及亚类及其它血清蛋白 双向扩散实验(Double Diffusion Test): 　 复杂抗原成分的精细分析及抗原抗体纯度测量 双向扩散实验(Double Diffusion T