疏水性相互作用色谱要点解析.pptVIP

疏水性相互作用色谱(HIC) 目录 一、概念 二、原理 三、疏水性的吸附剂 四、影响疏水性吸附的因素 五、疏水性相互作用色谱的操作 六、HIC的特点及应用 一、概念 疏水性相互作用色谱(Hydrophobic interaction chromatography，HIC)是利用表面偶联弱疏水性基团(疏水性配基)的疏水性吸附剂为固定相，根据蛋白质与疏水性吸附剂之间的弱疏水性相互作用的差别进行蛋白质类生物大分子分离纯化的洗脱层析法。 疏水性相互作用色谱 二、原理 组成蛋白质的氨基酸中包括一些疏水性氨基酸基团，如苯丙氨酸，酪氨酸；这些基团大部分处于蛋白质内部，但有部分疏水基团暴露于蛋白质表面。 在高离子强度盐溶液中，蛋白质表面的水化层被破坏，更多的疏水部分暴露在外，这些暴露在外的疏水基团与介质上的弱疏水性配基发生疏水性作用，被固定相(疏水性吸附剂)所吸附。 被固定相吸附蛋白质在疏水性吸附剂上的分配系数随流动相盐析盐浓度的提高而增大。 HIC采用高盐下吸附，低盐下洗脱。 盐浓过高， 沉淀不可 原理图示 Mechanism of HIC 三、疏水性吸附剂 常用配基 苯基、短链烷基、 烷氨基、聚乙二醇聚醚 修