CCK8对人外周血浆细胞样树突状细胞成熟和活化的调节.pdf

中文摘要 酸的免疫复合物)，能够迅速产生大量的I型干扰素。而TLR7／TLR9介导 子的表达和炎性细胞因子IFN-o,等的分泌。IFN．吨还可以通过激活cDC， 表达共刺激分子，并诱导单核细胞分化为moDC，激活自身免疫性CIM+ 和CD8+T淋巴细胞，与IL．6共同诱导自身反应性B淋巴细胞分化为成熟 的浆细胞分泌自身抗体。IFN-at诱导细胞毒性T淋巴细胞杀死组织细胞， 从而产生核小体和自身抗原片段，从而进一步加剧自身免疫病理生理过 程。IF]q-o,也直接促进血管的异常发生，参与自身免疫性疾病的早期病变 的形成。因此，如何能打破此恶性循环，重建免疫耐受将是治疗自身免疫 性疾病的关键。 子形式。它通过内分泌、旁分泌以及自分泌等多种方式作用于靶细胞，与 性细胞保护作用。CCK-1R属于G蛋白偶联受体家族，它偶联的是Gs或 1蛋白系统，如果是岱蛋白系统，激活腺苷酸环化酶活性，提高胞 Gq／l 内c籼汩水平，进一步激活PKA；如果是Gq／1l蛋白系统则通过肌醇磷 细胞内【cal增加并激活PKC，最终产生生物学效应。 本室前期工作显示CCK-8具有调节免疫细胞增殖、趋化、粘附、免 疫杀伤等功能，但是其对免疫系统功能的调节机制仍存在许多悬而未决 的问题，而且CCK-8能否通过调节DC功能进而影响适应性免疫应答， 用，国内外尚无人报道。基于以上原因，本课题以人外周血浆细胞样树突 细胞为研究对象，从细胞内外受体及其与配体的结合为切入点，就以下问 和CCK2R在pDC均有表达，我们将模拟体内DC赖以生存的复杂的生物 中文摘要 环境，并通过RNA干扰方法分别敲低两种受体的表达，探讨CCK-8调节 人外周血pDC免疫功能的受体信号相关机制。 lCCK受体在人外周血浆细胞样树突状细胞的表达 CCK2R结合发挥作用。本室以往研究结果表明小鼠骨髓源性cDC表达 在静息、成熟和活化的人外周血pDC的表达。通过检测健康人外周血pDC 活化的调节提供结构基础。 方法；取新鲜分离的健康志愿者抗凝外周血自细胞，通过淋巴细胞分 37℃，5％--氧化碳细胞孵育箱内孵育2小时，用预温的培养基除去非贴 测CCKIR和CCK2RmRNA的表达；测序验证PCR产物的特异性。分选 370C ODNclass 221 class pDC(m-pDC)；m-pDC在含CpGA(ODN6)或／和CpG B(ODN2006)(5It鲋叫)的完全培养基中培养24h，分化为活化状态的 CCKlR和CCK2RmRNA的表达；或经4％多聚甲醛固定 同状态的pDC (FITC标记抗兔和texas 抗作阴性对照，PCI2细胞做阳性对照细胞。最后甘油封片后，于荧光显 中文摘要 微镜或激光共聚焦显微镜下观察并照相，观察CCKlR和CCK2R蛋白的 表达。 的完全培养基中去悬浮培养6天，cDC纯度可达90％。(2)本研究首次发 系统可能参与了pDC的成熟与活化。 胞表面和单核细胞来源的髓系树突状细胞中均有表达。CD40L诱导的成 CCKlR和 熟pDCCCK2R表达显著增高，CpGODN诱导的活化pDC CCK2R表达均显著增高，而且两种受体在不同活化状态的pDC均有共定 位现象。为进一步研究CCK-8对人外周血来源DC的调节作用提供了结 构基础。 2CCK-8对人外周血pDC成熟和活化的影响 目的：本室以往研究结果表明CCK-8可以抑制LPS诱导的小鼠骨髓 源性cDC的成熟与活化。但是，CCK-8对人来源DC的成熟与活化有无 调节作用，对参与抗病毒免疫应答及自身免疫性疾病的发生发展的pDC 的免疫功能有无影响，国内外尚无人报道。DC成熟过程中伴随细胞表型 和功能的改变，本部分将直接用免疫磁珠分选法提取人外周血pDC进行 培养，模拟体内pDC赖以生存的环境，给予多种刺激因素诱导pDC成熟 活化，同时加入同种自体cDC和同种异体CD4+T淋巴细胞共同培养，观 察外源性CCK-8对健康人外周血pDC表面协同刺激分子的表达，细胞因 子的分泌以及激活适应性免疫应答等免疫功能的影响。 过程中伴随细胞表型和功能的改变，为观