植物脱毒技术汇总.pptVIP

为什么要培育脱毒苗 什么叫无病毒苗 “无病毒苗”——是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。 要脱除植物体内所有病毒包括未知病毒是不可能的，准确地说“无病毒苗”是指“特定无病毒”，也称“检定苗”。 对被病毒侵染的优良品种的植株进行脱毒，培育出无病毒母株，并在不受再侵染的条件下无性繁殖，是获得无病毒苗的根本途径。 病毒侵染到植株的叶片后,经过一段时间,即向附近细胞增殖转移,转移速度很慢,每小时只有几微米.当叶片内病毒浓度增大到一定量时,就转移到韧皮部,随后通过维管束转移到其他部分。 由于植株生长点附近病毒的浓度很低，甚至没有。所以，应用茎尖培养可以获得脱毒苗。 由于茎尖培养脱毒效果好，后代遗传性稳定，所以是目前生产上最常用的脱毒措施。 为什么茎尖培养能够除去病毒？ 注意： 不同种类的病毒，切取茎尖的大小也不相同 马铃薯X病毒，切取茎尖长度0.2-0.5mm茎尖培养，除可除去病毒外，尚可除去其他病原体; 马铃薯Y病毒，切取茎尖长度1.0-3.0mm. （一）茎尖剥离 取幼苗茎尖2-3cm小段，剥去可见大叶，放在烧杯内，用自来水冲洗1小时左右，移入无菌室进行严格消毒，先用75%酒精快速浸泡一下，再放入5%的漂白粉溶液内消毒7-10min,然后用无菌水冲洗3-4次。在双筒解剖镜下剥去幼叶，最后露出圆滑的生长点，用注射的针头侧刃或自制的解剖针，仔细地切取带有1-2个叶原基的生长点，随即接种到三角瓶内的培养基上进行培养。 二、其他组织培养脱毒 一、愈伤组织脱毒 将感染病毒的组织离体培养获得愈伤组织，再诱导愈伤组织分化成苗，从而获得无病毒植株的方法。 在受感染的组织形成的愈伤组织中，并非所有的细胞都均匀一致地带有该种病原。 在用机械方法由受烟草花叶病毒（TMV）侵染的烟草愈伤组织中分离出来的单个细胞中，只有40%带有这种病毒。由受侵染的愈伤组织中能再生出很多不含有TMV的植株。 三、理化方法脱毒 1、物理方法 2、化学处理 1、物理方法 温汤处理 热空气处理 低温处理 (1)温汤处理 将材料在500C左右的温水中浸渍10min至数小时。 适用于休眠器官、剪下的接穗或种植的材料； 缺点：易伤害材料 (2)热空气处理 将生长的盆栽植株移人温热治疗室(箱)内，一般在35~40℃。处理时间因植物而异，短则几十分钟，长可达数月。 香石竹于38℃下处理两个月，其茎尖所含病毒即可被清除。 草莓茎尖培养结合36 ℃处理6周，比仅用茎尖培养可更有效地清除轻型黄斑病毒。 热处理方法主要缺陷是并非能脱除所有病毒。 例如在马铃薯中，应用这项技术只能消除卷叶病毒。 而且对寄主植物作较长时间的高温处理有钝化植物组织中的阻抗因子，致使寄主植物抗病毒因子不活化，从而增加无效植株的发生率。因此热处理需与其他方法配合应用，才可获得良好的效果。 又称冷疗法。 如菊花在5℃条件 下分别处理4个月或7.5个月，没有菊花矮化病毒（CSV）的无病毒苗分别是67%和73%。 2、化学处理 许多化学药品(包括嘌呤、嘧啶类似物、氨基酸、抗菌素等)对离体组织和原生质体具有脱毒效果。常用的药品有：8-氮鸟嘌呤、2-硫脲嘧啶、杀稻瘟抗菌素、放线菌素D、庆大霉素等。例如，将100ug 2-硫脲嘧啶加入培养基可除去烟草愈伤组织中的PVY (马铃薯病毒)。 第二节 脱毒苗的鉴定 从上述途径培育得到的植株，必须经过严格的鉴定，证明确实无病毒存在，才是其正的无病毒苗，才可以提供给生产应用。鉴定的方法有多种。 一、直接检测法 症状是诊断病毒的主要依据。 根据植物体的生长状况，随时观察植株茎、叶、芽是否出现该种病毒所特有的可见症状。 这是最简单、最直接的测定方法。但是，由于可见症状可能要经过相当长的时间才能在寄主上表现出来，或病毒有隐症现象，因而检测的速度慢，准确性也不高。 二、指示植物法 指利用病毒在其他植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类标准的方法。因此，也称枯斑和空斑测定法。 用于专门产生病斑的植物称为指示植物，或鉴别寄主。 指示植物选取的要求：对病毒反应敏感、症状特征显著。 常用的指示植物有： 巴西牵牛（常用于甘薯） 千日红(鉴定马铃薯) 来源：最早是美国的病毒学家Holmes 1929年发现的。他用感染TMV的普通烟叶的粗汁液和少许金刚砂相混合，然后在烟叶子