基因工程9-DNA文库构建.ppt

第十一章 DNA文库的构建和目的基因的筛选 ? cDNA 克隆时常出现丢失末端序列的现象，需较长时间获得全长 cDNA 克隆。 cDNA 克隆中, 得到了不完整的片段, 可采用此方法获得 3‘ 末端和 5’ 末端的序列。工作原理见后图。筛选文库时一般只能回收一个或几个 cDNA 克隆， 而 RACE 可产生大量独立克隆。引物 GSP1 根据已经得到的不完整的 cDNA 的序列设计。 （3） RACE（ random amplification of cDNA ends）?? 第三节 基因克隆的筛选策略 一般来说，这一筛选过程的难易程度，主要取决于所采用基因的克隆方案和目的基因的性质与来源。从文库中筛选目的基因的方法主要有：核酸杂交法、特异性抗原的免疫学检测法、PCR筛选法。 基因克隆的本质：从文库中筛选目标克隆，重点在筛选。 常见筛选工具：探针（probe） 狭义：核酸，抗体 广义：还包括其他筛选手段。 ??? 生物体的表型特征由控制其性状的基因编码。因此，可以通过观察表型的变化来筛选目的基因。表型筛选法就是根据目的基因编码比较特殊的功能，并且载体的帮助下可以在宿主菌（如大肠杆菌）中表达该基因，表现出其特殊的功能所决定的表型性状来，这样就很容易通过导入的基因带来新的功能或恢复其缺