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干扰素制备的工艺流程 生命科学学院 生物技术 2010级7班 什么是干扰素？ 概念(interferon,IFN)：机体免疫细胞产生的一类细胞因子，是机体受到病毒感染时，免疫细胞通过抗病毒应答反应而产生的一组结构类似、功能接近的生物调节蛋白。 根据分子结构和抗原性的差异分为α、β、γ、ω等4个类型。 α干扰素又依其结构分为α1b、α2a、α2b等亚型 其区别在于个别氨基酸的差异上，早期干扰素是用病毒诱导人白血球产生的，产量低、价格昂贵，不能满足需要，现在可利用基因工程技术并在大肠杆菌中发酵、表达来进行生产。 目的基因的分离 一、目的基因的分离与获得 1. 设计合成干扰素基因的两端引物（完全的），每条引物内或5‘-端最好有内切酶酶切位点。 2. 有药物诱导细胞，如佛波酯，使细胞表达干扰素升高。 3. 破碎细胞，提取细胞总mRNA. 4. 用逆转录试剂盒逆转录，把总mRNA逆转录成cDNA 5. 以cDNA为模板、干扰素引物为引物，PCR，得到完全的干扰素基因的PCR产物 二、目的基因与克隆载体进行体外重组 1. 提取载体（质粒、病毒等），双酶切，再把干扰素基因的PCR产物用相应的酶酶切，用连接酶连接 三、重组体引入宿主细胞 将cDNA克隆到含有四环素、氨苄青霉素抗性基因的质粒pBR322中，转化到大肠杆菌，重组的载体 DNA 分子在一定条件