准确切割DNA的工具(“分子手术刀”) ——限制性核酸内切酶 DNA片段的连接工具(“分子缝合针”) ——DNA连接酶 E·coli DNA连接酶;T4 DNA连接酶 基因转移工具(“分子运输车”) ——基因进入受体细胞的载体 细菌的质粒;λ噬菌体衍生物;动植物病毒 一、目的基因的获取 方法: (1)从基因文库中获取目的基因; (2)利用PCR技术扩增目的基因; (3)通过DNA合成仪用化学方法直接合成 (一)从基因文库中获取目的基因 1.基因文库: 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断,导入到受体菌的群体中,各个受体菌分别含有这种生物的不同基因,称为基因文库。 区别:终止子和终止密码子 (2)反转录法(cDNA文库的构建方法) 以目的基因转录成的信使RNA为模板,再反转录酶的催化下反转录成互补的单链DNA,然后在DNA聚合酶的作用下合成双链DNA,即cDNA,从而获得所需的基因。 (3)利用PCR技术扩增目的基因 PCR是多聚酶链式反应的缩写。PCR是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。通过这一技术,可以在短时间内大量扩增目的基因。 终止子的作用: 终止子是位于基因尾端的一段特殊的DNA片断,能终止mRNA的转录。 作为载体必须具备的条件: 能在宿主细胞内稳定保存并大量复制; 有
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