1基因克隆解说.pptVIP

(2) 克隆载体 复制基因(replicator) 选择性记号 克隆位点 vector 4.1.3 基因文库 定义:基因组文库(gene library)：将某种生物的基因组DNA切割成一定大小的片段，并与合适的载体重组后导入宿主细胞，进行克隆。这些存在于所有重组体内的基因组DNA片段的集合，即基因组文库，它包含了该生物的所有基因。 基因组DNA文库 限制性内切酶 基因组DNA 基因重组 转化细菌 体外包装 特点及应用： 包含所有遗传信息 构建难度大（单拷贝基因、长片段基因） 筛选难度大 用于研究基因在基因组中的情况 3、构建cDNA文库，筛选目的基因 cDNA文库(complementary DNA library)以组织细胞中的mRNA为模板，反转录合成双链cDNA ，各cDNA分子分别插入载体形成重组子，再导入宿主细胞克隆扩增。这些在重组体内的cDNA的集合即cDNA文库。 cDNA文库仅包含正在表达的基因 不同物种、不同组织的cDNA文库不相同 基因总量少，易筛选 cDNA文库的组建： 基因重组 反转录酶 mRNA cDNA 4、PCR扩增目的基因片段 适用于克隆序列清楚的基因 以基因组DNA为模板，直接进行PCR扩增较难 多采用以mRNA为模板的RT-PCR法 限制性内切酶酶切 酶切 4.3 接 体外重组的策略 人工染色体 酵母人工染色体（ YAC ）是一类目前能