第20章重组DNA技术浅析.ppt

* * * * * * 4. 同聚物加尾连接 在末端转移酶(terminal transferase)的作用下，在DNA片段末端加上同聚物序列、制造出黏性末端，再进行粘端连接。 5′ 3′ 3′ 5′ 载体DNA 5′ 3′ 3′ 5′ 目的基因 限制酶或机械剪切 限制酶 5′ 3′ 3′ 5′ 5′ 3′ T(T)nT T(T)nT 5′ 5′ 3′ 3′ 5′ 5′ 3′ A(A)nA A(A)nA ′ 5′ λ-核酸外切酶 λ-核酸外切酶 末端转移酶 + dATP 末端转移酶 + dTTP T(T)nT A(A)nA A(A)nA T(T)nT T4 DNA连接酶 15oC 重组体 5. T-A克隆 是直接将PCR产物插入到载体中的方法。 第五节 重组分子的导入和筛选与鉴定 一、重组DNA分子的导入— 转 二、重组DNA分子的筛选与鉴定—筛 一、重组DNA分子的导入 宿主细胞应具备的条件 处于感受态 对载体无严格限制 限制酶和重组酶缺陷 不对外源DNA进行修饰 能表达重组体所提供表型特征 导入方式 转化 (transformation) 转染 (transfection) 感染 (infectio