第九章环境监测中的微生物学方法浅析.pptVIP

（二）大肠菌群的测定 常用多管发酵法与滤膜法： 发酵法： 又称多管发酵法或三步发酵法 初发酵（推测试验）：将不同稀释度的水样，分别接种于含有乳糖等糖类的培养液中（3倍或1倍乳糖液），经37oC培养24hr，观察产酸产气情况，以初步判断是否有大肠菌群存在。 2）平皿分离（证实试验） 水中除大肠菌群外，尚有其它细菌可能引起糖类发酵，因此需要进一步证实。 将初发酵管中已发酵的菌液接种于伊红美兰培养基或远藤氏培养基上，37oC培养24hr，根据菌落特征，挑取可能为大肠菌群的菌落制片，经革兰氏染色，进一步证实是否为大肠菌群。 3） 复发酵试验（完成试验） 将上述可能为大肠菌群的菌落再次转接入1倍乳糖培养液中，经37oC培养24hr，产酸产气者即最后确证为存在大肠菌群。 产酸、产气分别记为阳性反应，不产酸、产气则记为阴性反应； 根据阳性管数量，查表求得水体大肠菌群的数量。 2 滤膜法 发酵法全部检测需要的时间较长，为缩短时间，可以采用滤膜法，其步骤为： 1）水样过滤：选用具有微孔的滤膜，灭菌后通过抽滤一定量的待测水样，将水中的细菌截留在无菌滤膜上； 2）培养：将滤膜有菌面朝上贴于特定的固体培养基平板上（伊红美兰培养基或远藤氏培养基），经37oC培养16hr~18hr； 3）结果观察： 培养16hr~18hr后，挑选深红色或紫红色、不带或带有金属光泽的菌落，或者淡红色、中心色较深的菌落进行革兰氏染色观察，确定大肠菌群细菌。 G- ：接入乳糖培养液中，复发酵； G+：阴性结果。 经染色证实为G-无芽孢杆菌者，再接入乳糖蛋白胨半固体培养基中，37oC培养6~8hr，产气者判定为大肠菌群阳性。 4）结果计算： 根据滤膜上证实的大肠菌群数及滤过水量，求出1L水中的大肠菌群数量。 计算公式： 总大肠菌群数 = 滤膜上的菌落数以20~60个/片为适宜。 5）评价报告： 根据测定的数值写出检测水样的细菌学检测结果，予以评价。 滤膜上生长菌落数 × 1000 过滤水样量（mL） 滤膜法的优点： 省时、省料、设备要求低； 可以采集较多的检验水样。 局限性： 易受悬浮物干扰； 受其它细菌的干扰； 受水样中毒物的干扰。 第一章 环境监测中的微生物学方法 当环境受到污染后，环境的 物理性质 化学性质 生物学特性 如： 重金属离子、NO3- 浓度增加； 水体污染变质，水生生物种类减少，甚至灭绝； 发生变化 如何监测？ 化学方法：快速、定性定量反映污染物浓度，但为瞬时值； 生物学方法：利用生物种类、数量的变化，生物学特性的改变来监测污染物对环境的影响。 可监测到污染物对环境的综合影响，但不易精确反映污染物的性质、浓度和数量。 一、空气微生物来源 空气并非微生物的繁殖场所，空气中缺乏水分和营养，紫外线的照射对微生物也有致死作用。 土壤中飞扬起来的灰尘； 水面吹起的水雾、人和动物体表干燥脱落的物质，微生物附着于这些物质的微粒上随气流传播。 第一节 空气的卫生学检验 微生物产生的孢子本身也可以飘浮到空气中，形成 “气溶胶”，借风力传播。 空气中的微生物中，真菌的孢子数量最多，细菌较少。而且藻类、酵母菌、病毒都会存在于空气中 。 二、空气微生物的卫生标准 目前，还无统一的关于空气的卫生学指标，一般以室内1m3 空气中细菌总数为50~1,000个以上作为空气污染的指标。 病原菌在空气中一般很易死亡，但结核菌、白喉杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、流感病毒和脊髓灰质炎病毒等，也可以在空气中存活一段时间。 尘埃多的地方，如畜舍、公共场所、医院、城市街道的空气中，微生物数量较多。高山、海洋、森林、积雪的山脉和高纬度地带的空气中，微生物较少。 场所 畜舍 宿舍 城市街道 市区公园 海洋上空 北纬80o 微生物 (1~2)?106 2×104 5×103 200 1~2 0 表2-1 不同场所上空微生物的数量（个/m3 ） 表2-2 以细菌总数评价空气的卫生标准（个/m3 ） 清洁程度 细菌总数 最清洁的空气（有空调） 1~2 清洁空气 30 普通空气 31~125 临界环境 ~150 轻度污染 300 严重污染 301 三、空气的微生物监测 通常采用营养琼脂平板计数法。 我国检测空气微生物所用的培养皿直径为d90mm，有用d100mm的。 评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。测定的细菌指标有细菌总数和绿色链球菌，在必要时则测病原微生物。 (一)空气微生物的测定方法 1．固体法 固体法有平皿落菌法(沉降—平板法)、撞击法(有缝隙采样器、筛板采样器、针孔采样器)和过滤法。 (1)平皿落菌法：将