第五章基因与克隆载体的体外重...讲课.pptVIP

目的基因与克隆载体的体外重组 基因重组克隆与亚克隆 体外连接重组DNA分子的特点： （1）DNA体外连接减少了 DNA分子进入宿主细胞后遭受降解的危险，增加了转化效率； （2）由于限制性内切内产生的粘端在体外连接，使原来酶的识别序列在整个DNA中维持完整性，有利于在重组子转化扩增后再对外源基因进行分离； （3）连接时可控制连接反应条件，有利于形成环状分子或者几个DNA片段头尾相连接的直线多联体。 把DNA片段从某一类型的载体无性繁殖到另一类型载体，例如从重组的λ噬菌体克隆到质粒，或者从某种质粒克隆到另一种质粒，这种过程称为亚克隆。亚克隆通常是将较大的克隆片段经酶切后，再将所有的小DNA片段与另一载体连接、转化的程序。 基因重组对载体的要求与载体类型 选用克隆载体还是表达载体？ 表达型载体是能够使外源基因在宿主细胞内进行高效率表达的载体，一般要有强启动子和正确的终止子，能够高效地高拷贝地转录目的基因并且产生稳定的mRNA。 强启动子组建的高表达载体一般有三类： （1）含λ噬菌体的pL启动子的质粒： λ噬菌体的pL启动子是一个很强且容易调控的启动子。温度敏感型载体。 （2）含Lac启动子的质粒： Lac启动子是LacZ基因前的一个强启动子。 （3）含trp启动子的质粒： trp启动子是大肠杆菌色氨酸操纵子中的强启动子。 DNA体外重组是将目的