第五章培养基及设备的灭菌讲课.ppt

第五章 培养基及设备的灭菌 第一节 培养基灭菌的目的、要求和方法 一、定义 1. 培养基灭菌的定义 指从培养基中杀灭有生活能力的细菌营养体及其孢子，或从中将其除去。工业规模的液体培养基灭菌，杀灭杂菌比除去杂菌更为常用。 2. 灭菌与消毒的区别 灭菌：用物理或化学方法杀死或除去环境中所有微生物，包括营养细胞、细菌芽孢和孢子。 消毒：用物理或化学方法杀死物料、容器、器皿内外的病源微生物。 二、培养基灭菌的目的 1. 在发酵过程中夹杂其它杂菌造成的后果 2. 工业上具体措施 包括： （1）使用的培养基和设备须经灭菌； （2）好氧培养中使用的空气应经除菌处理； （3）设备应严密，发酵罐维持正压环境； （4）培养过程中加入的物料应经过灭菌； （5）使用无污染的纯粹种子。 3. 培养基灭菌的目的 4. 培养基灭菌的要求 （1）达到要求的无菌程度（10-3） （2）尽量减少营养成分的破坏 5. 灭菌的方法 （1）化学法 化学药品灭菌法 （2）物理法 干热灭菌法 湿热灭菌法 射线灭菌法 6，湿热灭菌的原理 当温度超过生长的最高限度时，微生物细胞中的原生质胶体和酶发生不可逆的凝固变性，使微生物在很短时间内死亡。 7. 湿热灭菌中的相关定义 致死温度：杀死微生物的极限温度。 致死时间：在致死温度下，杀死全部微生物所需的时间。 微生物的热阻：是指微生物在某一特定条件（主要是温度和加热方式）下的致死时间。 相对热阻：指某一微生物在某条件下的致死时间与另一微生物在相同条件下的致死时间的比值。 各种微生物对湿热的相对热阻 8. 湿热灭菌的优点 蒸汽来源容易，操作费用低，本身无毒 蒸汽有强的穿透力，灭菌易于彻底 蒸汽有很大的潜热 操作方便，易管理 第二节 湿热灭菌的理论基础 一、培养基湿热灭菌需解决的工程问题 1. 将培养基中的杂菌总数N0 杀灭到可以接受的总数N（10-3/ml）， 需要多高的温度、多长的时间为合理。 2. 灭菌温度和时间的确定 取决于： （1）杂菌孢子的热灭死动力学 （2）反应器的形式和操作方式 （3）培养基中有效成分受热破坏的可接受范围 二、微生物的热死灭动力学方程 K：比热死速率常数（死亡速率）（min-1） 取边界条件t0=0，N=N0，对（1）积分得 上式称为对数残留定律 死亡速率k，又称为灭菌速度常数 K越大，表明微生物越容易死亡。 一定温度下，比死亡速率k随微生物的种类不同而不同；同一种微生物其营养体细胞与芽孢的k也不同。 对热抵抗能力较弱：细菌营养体、酵母菌、放线菌、病毒及phage。 对热抵抗能力较强：细菌芽孢和霉菌的孢子。 三、温度对K的影响 从方程（4）可以看出： （1）活化能ΔE的大小对K值有重大影响 （2）不同菌的孢子的热死灭反应ΔE可能各不相同 例：嗜热脂肪芽孢杆菌 嗜热脂肪芽孢杆菌孢子死灭程度为N/N0=10-16时，灭菌温度对维生素B1破坏的影响 理论灭军时间的估算 培养基在灭菌前，存在各种各样的微生物，k值不同计算时，可以取对热抵抗力较大的芽孢杆菌的k值。 此时，A取1.34×1036s-1， ΔE取2.844×10-5J/mol。 即： 例：某发酵罐装培养基40m3，在121℃下进行分批灭菌。设每毫升培养基中含耐热的芽孢为107个，求理论灭菌时间。 解：N0=10×106×107=4×1014个 Ns=0.001个 算得：K=0.0281s-1 第三节 培养基灭菌的工程设计 一、无菌的标准 根据微生物热死灭方程，要求灭菌后达到绝对无菌。 在工程设计中常取N=10-3 二、分批灭菌 1. 分批灭菌的设计 在发酵罐中进行实罐灭菌，是典型的分批灭菌。 全过程包括升温、保温、降温三个过程。 孢子热死亡的规律符合 升温、冷却阶段T是时间t的函数，K不是常数，所以： 式中Kh是保温阶段的孢子比热死亡速度常数 分批灭菌中几种换热方式的温度-时间变化关系 2. 保证间歇灭菌成功的要素 （1）内部结构合理(主要是无死角)，焊缝及轴封装置可靠，蛇管无穿孔现象 （2）压力稳定的蒸汽 （3）合理的操作方法 发酵罐的接管图 4. 培养基间歇灭菌过程中应注意的问题 （1）温度和压力的关系 （2）泡沫问题 （3）投料过程中，麸皮和豆饼粉等固形物在罐壁上残留的问题