不同体外培养体系对胚胎发育影响.pdf

摘要 每个微孔内的胚胎周围，进而促进胚胎发育。目前关于微孔系统应用于胚胎培 养的研究相对较少，并且多集中于单微滴多微孔多胚胎培养研究，单微滴单微 孔单胚胎培养未见报道，特别是对于超微滴体积下微孔培养系统对于胚胎发育 的影响、微孔培养系统对玻璃化冷冻前后胚胎细胞凋亡的影响未见报道。 从卵巢中获取未成熟卵，在体外适宜的微环境和培养条件下培养成熟，从 vitro 而具备受精和胚胎发育能力，即为卵母细胞体外成熟(in maturation．IVM) 技术。基础研究和临床实践发现，ⅣM来源的胚胎质量差，囊胚形成率低，植入 能力下降，妊娠结局欠佳。究其原因，可能与卵母细胞在体外培养时胞核和胞 浆成熟不同步、卵子质量较差有关。在研究中发现，卵母细胞和其周围的颗粒 细胞通过内分泌、自分泌、旁分泌的方式相互影响，相互作用。颗粒细胞分泌 一些可溶性的营养物质促进胞核和胞质的成熟。是否可以利用WOW系统体外培 养未成熟卵子以提高卵子质量依然不明确，相关研究未见报道。 微滴法群组培养有利于提高胚胎的发育潜能，但是该培养方法无法追踪胚 胎的个体发育，同时过高的胚胎密度也容易导致代谢产物的堆积而增加培养微 滴的毒性。微孔系统培养仍处于实验研究阶段，培养条件仍需要摸索。而且目 前商品化的微孔培养用皿形式单一、规模较小，因此大多数生殖中心仍选择单 胚微滴法培养人的胚胎。传统的单胚微滴法培养面临着很多挑战，长时间的精 卵孵育可以导致许多毒性物质的堆积，阻碍早期胚胎的发育。许多研究提出， IVF技术改良之一的选择就是缩短受精时间，从16．18d,时缩短至1-4小时。对于 缩短精卵共孵育时间是否有利于胚胎发育仍存在争议。 本研究通过改变小鼠早期胚胎在微滴培养系统中的微滴体积、胚胎密度观 察评估胚胎发育结局；微孔培养系统培养早期胚胎获得囊胚行玻璃化冷冻，观 察冷冻前后囊胚细胞凋亡率的变化并评估技术安全性；微孔系统培养未成熟卵 子并进行后续胚胎培养，观察评估微孔系统对卵子和胚胎的发育潜能的影响； 人胚胎单胚培养系统中缩短精卵共孵育时间观察胚胎发育和妊娠结局等探索不 同的体外培养体系对胚胎发育的影响。经查新未见相同报道。 Ⅱ 摘要 第一部分：不同体积和胚胎密度的微滴和微孔培养系统对早期鼠胚 发育的影响 研究目的： 探讨早期小鼠2细胞胚胎的最佳培养微滴体积和胚胎密度，并评估胚胎共培 养时间以及WOW培养系统对胚胎质量的影响 研究方法： 养；(2)3、6、9和12个2细胞鼠胚在50pl微滴中培养；(3)9个／微滴2细胞胚 胎在50 胎分别在50 pl微滴和WOW系统中培养，单个鼠胚分别在5．5pl的微滴和 养。所有分组比较囊胚形成率、孵出率和囊胚细胞数目。 结果： 9个2细胞胚胎在50pl微滴中培养囊胚形成率最高(84．7％)。与群组培养 相比，单个胚胎培养囊胚形成率降低。胚胎共培养72．96h囊胚形成率增高，96h 囊胚率为84．7％。与微滴法相比，单个胚胎在WOW系统中培养囊胚形成率无明 显差异。但群组培养的囊胚细胞数目明显高于单个胚胎培养。另外，单个胚胎 在WOW中培养获得囊胚细胞数目明显高于微滴法。单WOW系统体中微滴积 缩小至1．2山，囊胚形成率未发明显差异，但是囊胚孵出率、细胞总数明显增高。 结论： 50J_tl微滴9个2细胞胚胎是群组培养的最佳培养体积／密度。胚胎共同培养超 过72h有利于改善胚胎发育潜能。50 pl的WOW系统能够改善胚胎质量并追踪 个体胚胎发育，但是仍不能克服单胚发育的缺陷。微滴体积减少至1pl时有助于 提高单独培养胚胎的发育潜能。 III 摘要 第二部分：微孔培养系统对小鼠囊胚玻璃化冷冻前后的细胞凋亡 影响和技术安全性评估 研究目的： 通过比较群组培养系统和单胚培养系统、微滴法和WOW法获得的囊胚玻璃 化冷冻前后的凋亡率的比较来判断WOW培养系统