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1．分离原理－分子筛效应 一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，各分子在柱内同时进行着两种不同的运动：垂直向下的移动和无定向的扩散运动。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布于颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出，这种现象叫分子筛效应。 2.固定相 化学惰性的多孔性材料，一般可分为软性、半刚性和刚性凝胶三类。凝胶指含有大量液体（一般是水）的柔软而富于弹性的物质，它是一种经过交联而具有立体网状结构的多聚体。 3．流动相在凝胶色谱中，流动相的作用不是为了控制分离，而是为了溶解样品或减小流动相粘度。凝胶色谱所选用的流动相必须能溶解样品，并必须与凝胶本身非常相似，这样才能润湿凝胶。当采用软性凝胶时，溶剂也必须能溶胀凝胶。另外，溶剂的粘度要小，因为高粘度溶剂往往限制分子扩散作用而影响分离效果。这对于具有低扩散系数的大分子物质分离，尤需注意。选择溶剂还必须与检定器相匹配。 分离类型的选择 1．根据相对分子质量选择 相对分子质量十分低的样品，其挥发性好，适用于气相色谱。标准液相色谱类型（液一固、液一液、及离子交换色谱）最适合的相对分子质量范围是20O～2000。对于相对分子质量大于2000的样品，则用凝胶色谱法为最佳。 2．根据溶解度选择弄清样品在水、异辛烷、苯、四氯化碳、异丙醇中的溶解度是很有用的。如果样品可溶于水并属于能离解物质，以采用离子交换色谱为佳；如样品可溶于烃类（如苯或异辛烷），则可采用液一固吸附色谱；如样品溶解于四氯化碳，则多采用常规的分配和吸附色谱分离；如样品既溶于水又溶于异丙醇时，常用水和异丙醇的混合液作液一液分配色谱的流动相，以憎水性化合物作固定相。  液相色谱分离类型选择参考图 溶于水——凝胶过滤色谱，水为流动相 相对分子质量 ＞2000 不溶于水——凝胶渗透色谱，非水流动相 同系物——分配色谱 不溶于水 异构体——吸附色谱 样品 分子大小差异——凝胶色谱 反相液一液色谱 相对分子质量 溶于水，不离解 ＜2000 凝胶色谱，水为流动相 碱——阳离子交换色谱 溶于水，可离解 酸——阴离子交换色谱 溶于水， 离子与非离子—反相离子对色谱 一、高效毛细管电泳基本原理 二、仪器装置 三、影响柱效的因素及改进方法 四、主要特点和应用 高效毛细管电泳仪器（1） 高效毛细管电泳仪器（2） 高效毛细管电泳仪器（3） 一、高效毛细管电泳基本原理 2. 高效毛细管电泳技术上的重要突破 3. 电泳现象与电渗流现象 4. 分离过程 (3) 毛细管胶束电动色谱（MECC） 二、仪器装置 三、影响柱效的因素及改进方法 四、主要特点和应用 3．根据分子结构选择 用红外光谱法，可预先简单地判断样品中存在什么官能团。然后，确定采用什么方法合适。例如，酸、碱化合物用离子交换色谱；脂肪族或芳香族用液一液分配色谱、液一固吸附色谱；异构体用液一固吸附色谱；同系物不同官能团及强氢键的用液一液分配色谱。 柱的使用和维护注意事项 ①避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色