核酸提取试剂盒分析.pptVIP

4.苯酚抽提法： 苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA 。此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态 。 5.水抽提法：利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ，80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,即得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS。 6.阴离子去污剂法：用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA。 DNA提取方法 磁珠法：生物磁珠是一种新型的功能化固体载体，其表面包被有活性基团，可以与多种生物活性物质发生偶联，兼具有液体的流动性和固体磁性材料等特点，在外磁场的作用下可以定向移动和集中，当撤去外磁场后，稍加振荡或抽吸又可均匀分散于液体中，从而使固液相的分离变的十分快捷方便，通过简单的洗脱可以得到纯度很高的靶向物质。 核酸提取试剂盒 离心柱子法 柱子 磁珠法 生物磁珠 离心柱试剂盒（细菌）概述 本试剂盒用于极大部分革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌细胞基因组DNA的提取。该试剂盒提供的方法简单易行，通过去垢剂处理和特殊的液体系统将裂解细胞后产生的DNA结合在柱材上，避免酚仿抽提。所获的基因组DNA具有完整性好、产量大、纯度高和稳定性好等特点。可以满足PCR、酶切、分子杂交和文库构建等各种分子生物学实验需要。 离心柱试剂盒组成? 离心柱及收集管?? 各 xxx个 溶菌酶缓冲液 ELB xxxml 裂解液 GDL xxxml 缓冲液 GDB xxxml 蛋白洗涤液 PWB?? xxxml 洗涤液 WB?? xxxml 蛋白酶 K xxxml 洗脱液 EB xxxml 离心柱操作步骤 所有离心步骤皆使用台式离心机，为室温下操作。 第一次使用前请先参考试剂瓶上的标签，在洗涤液WB中加入无水乙醇。 1.取适量的细菌培养液（最多提取的细菌数量为2×109个），10,000rpm离心1分钟，弃上清，留细菌沉淀备用。 2.提取的细菌为革兰氏阴性菌，可以在菌体沉淀中加入200μl裂解液GDL。用吸头吹打几下，充分混匀。然后进入步骤4 3.提取的细菌为革兰氏阳性菌，必须要进行溶菌酶破壁处理（如不确定为何种菌属，请按处理革兰氏阳性菌的方法进行）。具体操作如下：称20mg溶菌酶，置于1.5ml离心管中，取1ml溶菌酶缓冲液ELB，反复吹打几次将溶菌酶完全溶解，配制成溶菌酶裂解液。向细菌沉淀中加入200μl溶菌酶裂解液（未用完的溶菌酶裂解液可保存于‐20℃，以备下次使用），吹打重悬细菌沉淀。37℃破壁处理30分钟以上，一些较难处理的细菌可以延长处理时间。破壁处理完成后便可以将水浴温度调至70℃备用。 4.RNA清除处理，补加5μlRNase?A溶液，充分混匀。 5.加入15μl蛋白酶K，充分混匀。 6.加入220μl缓冲液GDB充分混匀。加入缓冲液GDB可能会出现白色沉淀，放置于70℃水浴时便会消失。 离心柱操作步骤 7.对于革兰氏阴性菌70℃保温15分钟（革兰氏阳性菌需70℃保温30分钟）。等溶液变成清亮后，离心数秒去除管壁上的水珠。如果溶液未变清凉，说明细菌裂解不充分，起始菌量太大，需要适当调整。 8.加